CN101522265A - 局部皮肤用组合物、它们的制备方法和它们的应用 - Google Patents

Abstract

局部皮肤用组合物，其包含含有组分的复合物来提供防护作用，避免在人体(包括皮肤)上的自由基、活性氧簇、活性氮簇和其它氧化性物质的各种途径机理(的损害)。这些组合物能够以抑制这些机理的用量局部施涂它们来施用。本发明的组合物和方法涉及自由基、活性氧簇、活性氮簇和其它氧化性物质对人身体(包括皮肤)的不利或有害影响的防止。因此，根据本发明的组合物改进阻隔功能，抑制弹性蛋白酶和胶原酶，和/或促进胶原和弹性蛋白的合成。

Description

局部皮肤用组合物、它们的制备方法和它们的应用

相关申请的交叉引用

本申请是2006年7月31日递交的美国专利申请序列号No.11/497,152的继续，该美国专利申请是2002年5月24日递交的美国专利申请序列号No.10/155,305的部分继续申请，而后者进而是2001年5月31日以英语作为WO/2001/037788出版的PCT/US00/31933的部分继续申请。这些申请中的每一件的全部内容被引入本文，就象再次充分阐述一样。

发明背景

鉴于老年化的人口，已经增加了对老年化的研究，因为这牵涉到人体，更具体地说牵涉到人的皮肤。例如，以细纹线、皱纹等的存在所显示的老化皮肤的处理已受到很多关注。老年化的皮肤标志如细纹线、皱纹、松弛和色素沉着过度已经通过包括外科手术、激光处理和化妆品在内的许多手段来防止。化妆品处理包括各种霜剂和化妆水的使用，以改变皮肤老化的影响。现有技术中许多文献集中于单种主要组分的使用，以防止几个有害的老化影响中的一个。例如，一种策略是使用一种或多种醇酸或视黄酸刺激真皮细胞的再生长，没有其它组分。这一途径是有缺陷的，因为它没有认识到老化是由多种试剂对皮肤的有害相互作用所引起的，来源于多种影响源，通过多个同时损害途径对皮肤造成损害。

更全面的研究已经发现：环境因素，如应激、日光暴露和食物、水和空气中的杂质也不利地影响皮肤的表皮层和真皮层的组分，进而影响和改变皮肤的外观并导致过早老化的外观。例如，一些因素，如自由基、活性氮簇(active nitrogen species)(“RNS”)、活性氧簇(active oxygen species)(“ROS”)和可具有或可不具有各自由基、RNS和ROS的特性的其它氧化性物质(oxidizing species)(“OOS”)将会不利地影响人的身体(包括皮肤)。已发现会损害和不利地影响皮肤外观的以上指出的组之内的具体因素包括一氧化氮、超氧化物自由基、过氧化氢和羟自由基。这些因素已经牵涉到许多的皮肤病症，包括光致损伤、皮肤的一般老化、接触性皮炎、起皱纹、脂质过氧化、酶降解、胶原和/或弹性蛋白的减少和破坏、DNA的降解和受抑制的复制、炎症和对皮肤组织的一般损害。

ROS物质包括超氧化物(O2-)、过氧化氢(H2O2)、过氧自由基(HO2和RO2)、烷基过氧化物(R2O2)、羟基自由基(OH)、烷氧基自由基(OR)和单线态氧。OOS物质包括次卤酸(HOX)(其中X是氯、溴、碘)、Z-胺(其中Z是氯化或氨化的含胺化合物)、活性氮簇(“RNS”)一氧化氮(NO)、氨、环加氧酶、磷脂酶A2、磷脂酶C和过渡金属。

认为ROS中的每一种(直接或作为中间体)作用于细胞膜和/或其它细胞成分(包括细胞器及其内容物)，以不利地损害皮肤。因此，仍然需求局部用皮肤处理组合物和方法，该组合物和方法针对以上指出的ROS、RNS和OOS中的每一种提供防卫作用。另外，如果此类组合物修复由以上所指出的ROS、RNS和OOS所引起的损伤，则是所希望的。

发明概述

本发明涉及包括所选择的组分的组合物，其针对于不利地影响人体(包括皮肤)的以上所指出的自由基、活性氧簇、活性氮簇和其它氧化性物质(oxidizing species)的各种途径机理提供防卫作用。本发明因此还包括将本发明的组合物施用于皮肤，以抑制不利地影响皮肤的病因性因素，由此治疗并改善皮肤质量的方法。一般地，本发明的组合物和方法涉及防止以上所指出的自由基、活性氧簇、活性氮簇和其它氧化性物质对人体(包括皮肤)的不利或有害影响。因此，本发明包括各种组合物，其包含至少一种抗自由基组分和/或抗超氧化物组分和/或抗过氧化氢组分和/或抗羟基自由基组分和/或断链组分。

本发明的实施方案包括组合物，该组合物包含有助于细胞能量产生的组分和/或有助于胶原合成和/或弹性蛋白合成和/或抑制它们的降解的组分，和/或有助于或提供细胞活性的组分。例如，已发现积极影响一种或多种上述因素的本发明组合物包含：柑橘组分如葡萄柚组分(如葡萄柚提取物)、超氧化物歧化酶组分、谷胱甘肽组分、四氢二阿魏酰甲烷组分和/或姜黄组分(如姜黄提取物)、生物类黄酮组分(如柑橘生物类黄酮组分)、葡萄组分(如葡萄籽提取物)、绿茶组分(如绿茶提取物)、生育酚和生育酚衍生物如生育酚乙酸酯。

已经类似地发现积极影响改善皮肤健康的因素的本发明的另一个实施方案是一种组合物，该组合物包含大豆组分(如大豆蛋白组分)、稻米(rice)组分(如稻米蛋白和更具体的水解稻米蛋白)和向日葵籽组分(如向日葵籽提取物)。

本发明的再一种组合物包含积雪草组分(如积雪草提取物)、玉米仁组分(如玉米仁提取物)、海藻组分(如海藻提取物)和泛醌(辅酶Q)。

本发明的另一种组合物包含：迷迭香组分(如迷迭香提取物)、卵磷脂组分、神经酰胺组分(如神经酰胺3组分)、谷甾醇组分(如β谷甾醇)、甘油组分、泛醇组分、脯氨酸组分(如L-脯氨酸)和透明质酸盐组分(如透明质酸钠)。

如以下进一步解释的，本发明进一步包括组合物，该组合物含有在以上段落中提到的每一种前述组合物组分(更具体为其中所含的活性剂)中的一种或多种的组合。

因此，还提供了为了以上所指出的任何原因将组合物施用于皮肤上、维持和/或改善个体的皮肤状况的方法。因此，组合物可以施用于皮肤上，例如局部地施用一定量(例如有效量)的本发明的各种组合物中的一种或多种。

本文提供根据本发明的组合物的制备方法。

附图简述

图1是显示了在施用配制剂的人皮肤上UV暴露后30分钟时的红斑增加的图示。

图2是显示了在施用配制剂的人皮肤上UV暴露后10小时时的红斑增加的图示。

图3是显示了样品对原胶原分泌的影响的图示。数据表达为通过将组织培养上清液中检测到的原胶原的量除以WST-1减少量所计算的胶原/存活力比率，作为在暴露时期之后细胞存活能力的指标。

图4是显示了样品对弹性蛋白分泌的影响的图示。数据表达为通过将在组织培养上清液中检测到的弹性蛋白的量除以WST-1减少量所计算的弹性蛋白/存活力比率，作为在暴露时期之后细胞存活能力的指标。

图5是显示了样品对MMP-1活性的影响的图示。数据表达为％对照MMP-1活性。水平线表示100％活性。

图6是显示了样品对MMP-9活性的影响的图示。数据表达为％对照MMP-9活性。水平线表示100％活性。

图7是显示了样品对弹性蛋白酶活性的影响的图示。数据表达为％对照弹性蛋白酶活性。水平线表示100％活性。

图8是显示了样品对由RAW264.7细胞所进行的NO生产的影响的图示。数据表达为与LPS刺激的阳性对照相比而言的所产生的％NO。L6＝Lipochroman-6、NT＝Nutriene生育三烯酚类、TQS＝γ-生育醌S、VC＝Viapure Citrus、SZ＝Soybean Zymbiosome、NPR＝NAB Pikea robusta。

图9是显示样品对HEK001角质化细胞中脂质染色的影响的图示。数据表达为来自未处理的细胞的％对照脂质。

发明详述

正如在以上概述中所解释的，本发明提供组合物，该组合物提供对抗人体(包括皮肤)上各种的自由基、活性氧簇、活性氮簇和其它氧化性物质的防卫机理。这些组合物通过，例如，增加皮肤细胞中的能量和/或抑制不利的酶和/或维持和/或改进皮肤中的弹性蛋白、胶原和糖胺聚糖的质量和数量，来帮助维持和/或改善皮肤状况。

一般而言，本发明的组合物包含一种或多种的以下组分：

柑橘(citrus)组分，例如葡萄柚组分，如葡萄柚提取物组分，优选葡萄柚皮提取物，优选芹菜素(apigenin)组分；

超氧化物歧化酶组分；

谷胱甘肽组分；

四氢二阿魏酰甲烷组分；

酚类组分，如多元酚组分；

精油组分；

抗坏血酸组分；

姜黄组分，如姜黄提取物；

类黄酮组分，例如生物类黄酮组分，如柑橘生物类黄酮；

葡萄组分，如葡萄籽提取物；

绿茶组分，如绿茶提取物；

生育酚和/或它们的衍生物，如乙酸生育酚酯；

大豆组分，如大豆蛋白组分；

稻米组分，如稻米蛋白，更具体为水解稻米蛋白；

向日葵籽组分，如向日葵籽提取物；

甲氧基肉桂酸辛酯(octinoxate)组分；

丁基甲氧基二苯甲酰基-甲烷组分；

积雪草组分，如积雪草提取物；

玉米仁组分，如玉米仁提取物；

海藻组分，如海藻提取物，优选掌状海带提取物；

四异棕榈酸抗坏血酸酯组分；

辅酶组分，如泛醌(辅酶Q)；

迷迭香组分，如迷迭香提取物，优选熊果酸组分；

卵磷脂组分；

神经酰胺组分，如神经酰胺3；

β谷甾醇组分；

甘油组分；

泛醇组分，如d-泛醇；

腺苷组分；

脯氨酸组分，如L-脯氨酸；

透明质酸盐组分，如透明质酸钠盐；

碳水化合物组分；

B维生素组分；和

phylate组分。

本文使用的术语“复合物(complex)”意指为了关注与哺乳动物皮肤的健康和维护有关的常见话题所选择的各种成分的掺混物。这些成分的一种此类复合物将集中于调节活性氧簇和活性氮簇的作用。

因其抗氧化剂性能而通常用于防止对皮肤的自由基损害、因此防止自由基损害引起的老化效应的此类组合物的一个具体实施方案包括柑橘组分(优选含有芹菜素的柑橘组分)的组合。所述柑橘组分可以从柠檬、橙子、橘子、葡萄柚、胡椒、荞麦、黑茶藨子(black currents)、杏、樱桃、葡萄和梅子得到。优选的柑橘组分是葡萄柚组分，更具体为包含芹菜素的或简单是芹菜素的葡萄柚提取物。已经发现柑橘组分(尤其含有芹菜素的柑橘组分，如水果提取物，更具体为葡萄柚提取物)抑制由活性氮簇(尤其，一氧化氮(NO)产生)所引起的损害。已进一步发现柑橘组分抑制脂质过氧化，以及由自由基引起的炎症。因此，已发现含有柑橘组分(尤其优选含有芹菜素的葡萄柚提取物组分)的本发明组合物抑制由一氧化氮产生和/或脂质过氧化引起的对皮肤的损害和/或抑制炎性因子(如由自由基引起的炎症)。

组合物一般进一步包含超氧化物歧化酶组分，它抑制由侵蚀例如酶的超氧化物所引起的对蛋白质、弹性蛋白、胶原和DNA的损害；和谷胱甘肽组分，它抑制由过氧化氢所引起的损害。该组合物的另外组分可包括酚类组分和/或一种或多种所谓的“精油”和/或抗坏血酸(“维生素C”)和/或四氢二阿魏酰甲烷，其例如可在姜黄组分(如姜黄提取物)中发现。其它组分可包括类黄酮组分，例如生物类黄酮组分，如来自例如葡萄柚、柠檬或橙子的柑橘生物类黄酮组分；和多元酚组分，它例如可在葡萄组分(如葡萄籽提取物)中见到，优选原花青素(procyanidolic)低聚物；绿茶组分，优选包括多元酚，尤其表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)；生育酚和/或乙酸生育酚酯，各自是抑制由侵蚀脂质的羟基所引起的损害的组分。

因此，在一个具体的实施方案中，该组合物包含约0.01％～约1％的量的葡萄柚提取物、约0.0001％～约0.01％的量的超氧化物歧化酶、约0.01％～约1％的量的谷胱甘肽、约0.001％-约1％的四氢二阿魏酰甲烷或姜黄提取物，约0.001％～约1％的量的柑橘生物类黄酮、约0.001％～约1％的量的葡萄籽提取物、约0.01％～约1％的量的绿茶提取物、约0.01％～约2％的量的生育酚、约0.01％～约5％的量的乙酸生育酚酯。

因此，将会认识到，一般性如上所述的组合物可通过减少炎症、脂质过氧化以及胶原、弹性蛋白和DNA的降解之中的一种或多种所导致的有害影响来维持和/或改善皮肤质量，从而维持年轻外观。

在本发明的另一个具体实施方案中，组合物将一般包含大豆组分，如大豆蛋白组分，优选异黄酮，如染料木黄酮和大豆黄酮。已发现所述大豆组分是弹性蛋白酶的抑制剂，弹性蛋白酶响应于诸如暴露于紫外线、干燥和一般环境应力之类的因素而释放到皮肤上。因此，该大豆组分帮助维持和/或提高皮肤(特别是受到日光照射的紫外线损伤的那些皮肤)的坚实度和弹性。组合物的这种实施方案一般还包含稻米组分，如稻米蛋白，更具体为水解稻米蛋白，它对于胶原酶有抑制效果。胶原酶的抑制有助于保护皮肤中的胶原，由此维持和/或改善关于弹性、坚实度、皱纹、干燥度和老年斑方面的皮肤状况。向日葵籽组分，如向日葵籽提取物也可包括在这种实施方案中。已发现向日葵籽组分用作抗糖化因子(anti-glycationfactor)，并且通过延迟各种引起胶原随着年龄而变硬和引起以上讨论的其它有害因素的变化来维持和/或改善皮肤状况。组合物可进一步包含甲氧基肉桂酸辛酯组分和/或丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷组分。

因此，在一个具体的实施方案中，该组合物包含约0.01％～约3％的量的大豆蛋白(野生大豆(Glycine Soja))、约0.01％～约3％的量的水解稻米蛋白、约0.01％～约3％的量的向日葵籽提取物。

本发明的其它具体实施方案是包含积雪草组分(如积雪草提取物)的组合物。已发现该积雪草组分促进胶原和弹性蛋白的合成，从而维持或改善皮肤的坚实度、弹性和一般强度。主要的活性成分是皂角苷(三萜类(triterpenords))，其包括积雪草皂苷、羟基积雪草苷和马达积雪草酸。该实施方案中可包括玉米仁组分，如玉米仁提取物，更具体肌醇，它提供几个益处，包括帮助细胞中的能量产生和储存，抑制脂质过氧化，并且它一般是有效的抗氧化剂。可单独地或相结合地包括在组合物中的玉米仁提取物组分包括氮元素、碳水化合物、B族维生素、微量元素和/或phylate形式的肌醇。海藻组分如海藻提取物(例如，掌状海带提取物)可以进一步包括在该实施方案中，并且当包括时它有助于提高细胞间ATP比率和增加细胞和组织的氧化，因此通常增大皮肤的结构。最后，可以包括泛醌(辅酶Q)组分，它(特别在细胞中能量的产生中)，任选与抗坏血酸四异棕榈酸酯一起，用作各种重要的酶促途径的辅酶。

因此，在一个具体的实施方案中，该组合物包含约0.01％～约3％的量的积雪草提取物、约0.01％～约3％的量的玉米仁提取物、约0.01％～约3％的量的海藻提取物、约0.001％～约1％的量的辅酶Q-10。

本发明的其它具体实施方案是通常为皮肤提供水脂(hydrolipid)基质的组合物。该组合物一般包含迷迭香组分，如迷迭香提取物，优选迷迭香酸、酚类双萜、鼠尾草酚、鼠尾草酸或熊果酸，或简单地是熊果酸。迷迭香提取物优选得自迷迭香叶子的提取物。优选将迷迭香组分包封在脂质体中以增强传递。另外的组分一般包括一种或多种的以下组分：卵磷脂组分、神经酰胺3组分、磷脂(如β谷甾醇)组分、甘油组分、泛醇组分、脯氨酸组分(如L-脯氨酸)和透明质酸盐组分(如透明质酸钠)；以上组合物的各种组分的子组合(Subcombinations)优选包含迷迭香组分(如迷迭香提取物，优选迷迭香叶子的提取物)和卵磷脂组分。该子组合有助于脂质保留和在皮肤之中和之上形成水分层屏障。以上组合物的另一个子组合优选包含卵磷脂组分、神经酰胺3组分和β谷甾醇组分，或优选包含神经酰胺3组分和β谷甾醇组分。以上组分的该子组合还有助于脂质保留和在皮肤之中和之上形成水分层屏障。

因此，在一个具体的实施方案中，该组合物包含约0.0001％～约1％的量的迷迭香提取物、约0.001％～约0.1％的量的包括神经酰胺3在内的脂质复合物和约0.0001％～约0.1％的量的β-谷甾醇、约0.1％～约10％的量的甘油、约0.01％～约1％的量的泛醇、约0.001％～约1％的量的脯氨酸和约0.001％～约5％的量的透明质酸钠。

将会认识到，前述组合物和子组合中的每一种可以单独使用，或可与其它组分组合使用，以形成其它的新配制剂。因此本发明进一步包括组合物，其含有，与下面讨论的另外组分进一步组合的，前述组合物组分中的(每一种的)一种或多种的组合。

本发明的组合物还可包含化妆品或药物学上可接受的载体。可将组合物的组分包封在例如脂质体胶囊中。当存在载体时，该复合物占总组合物的约0.01％～约10％(按重量)，优选占总组合物的约1％～约7％(按重量)。

通常，该抗超氧化物组分可以包括具有抗超氧化物活性的那些物质，尤其具有超氧化物歧化酶活性的那些物质。换句话说，它包括能够催化歧化反应的那些组分。例如，它包括超氧化物歧化酶(SOD)，通过接枝聚亚烷基氧、聚乙二醇、多糖或酰化基团改性的SOD，SOD的盐，含有该SOD产物的物质，卟啉(porphorins)和具有超氧化物歧化酶样活性的物质。在这方面，它包括在EP 223257中提到的那些产物，该专利的相关内容引入本文供参考。

如上所述的所有超氧化物歧化酶，以及本领域技术人员能够从文献中推知的变型和等同物适合作为用于本发明中的SOD。另外，它们能够属于不同的来源。例如，它们可以是动物(牛、猪等)、人(血液)或植物(真菌、藻类、菠菜等)。它们也可从细菌或酵母获得，或者通过生物技术路线获得。可用于本发明中的SOD的例子已描述在美国专利No.5,526,507中，其内容引入本文供参考。SOD可以是复合物的约0.0001％～约5％，0.01％～约5％(按重量)。更优选，SOD以约0.1％～约2％(按重量)的量包括在复合物中。

一般地，抗过氧化氢组分可以是硫醇或硫醇衍生物。在本发明的上下文中，术语硫醇应理解为以-SH基团表征的有机化合物。硫醇衍生物是保留-SH基团的衍生物或是硫醚或者硫代酯，在这种情况下-SH基团转化成-SR基团。

被理解为与根据本发明的硫醇或硫醇衍生物等同的化合物是通过互变异构现象、由氢键合引起的二聚或低聚、水合或其它自发重排从该硫醇或硫醇衍生物形成的那些。如果衍生物通过不同类型的重排(例如烷基的迁移)与异构体保持平衡，则认为该异构体包括在本发明的硫醇和硫醇衍生物之中。

合适的硫醇和硫醇衍生物可以包括甲巯丙脯酸、半胱胺、麦角硫因(ergothioneine)、巯基丙酰甘氨酸、青霉胺、N-乙酰半胱氨酸、S-乙酰半胱氨酸、N，S-二乙酰半胱氨酸、N，S-二乙酰半胱氨酸酰胺、半胱氨酸乙酯、N-乙酰基半胱氨酸乙酯、S-乙酰半胱氨酸乙酯、N，S-二乙酰半胱氨酸乙酯、巯基乙酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、谷胱甘肽、硫甘油、硫羟苹果酸、2-巯基丙酸、3-巯基丙酸、硫二甘醇、2-巯基乙醇、二硫苏糖醇(dithioreitol)、噻吨、硫代水杨酸、硫羟乳酸、硫代丙酸、硫代二乙醇酸、硫辛酸和它们的化妆品上可接受的盐。

本文使用的化妆品上可接受的盐包括但不限于碱金属盐，例如钠、锂、钾和铷盐；碱土金属盐，例如镁、钙和锶盐；无毒的重金属盐，例如铝和锌盐；硼盐；硅盐；铵盐；三烷基铵盐，例如三甲基铵和三乙基铵，和四烷基氧鎓盐。

一般地，该抗过氧化氢组分能够以占复合物的约0.001％～约5％(按重量)，优选约0.01％～约2.5％(按重量)，更优选约0.1％～约1％(按重量)的量混入到复合物中。

一般地，抗羟基自由基组分能够包括一种或多种的下列物质：生育酚、生育酚衍生物、四氢二阿魏酰甲烷、葡萄籽提取物(例如vitis vinifera(葡萄)籽提取物)、葡萄柚提取物(例如，citrus grandis(葡萄柚)提取物)、绿茶提取物(例如，camellia sinensis茶(叶)提取物)、姜黄酸、类姜黄色素(curcuminoids)、四氢姜黄素(tetrahydrocurcuminoid)、儿茶素、表没食子儿茶素3-O-没食子酸酯和多元酚，低聚原花色素、生物类黄酮、类黄酮，和它们的混合物。

生育酚(维生素E)和它的衍生物(如生育酚的酯)可用于本发明的组合物中。合适的生育酚包括母育酚的单甲基、二甲基或三乙基衍生物，其包括但不限于α生育酚、β生育酚、γ生育酚、δ生育酚、ε生育酚、ξ生育酚和η生育酚。生育酚的合适酯包括但不限于乙酸生育酚酯、琥珀酸生育酚酯、苯甲酸生育酚酯、丙酸生育酚酯、山梨酸生育酚酯、油酸生育酚酯、乳清酸生育酚酯、亚油酸生育酚酯、烟酸生育酚酯和2-乙基-己酸酯。

当生育酚和/或它的衍生物包括在本发明的复合物中时，它们的用量为约0.01％～约98％，优选约0.01％～约5％，0.01％～约2％。

四氢二阿魏酰甲烷和/或姜黄提取物也能够以复合物的约0.1％～约20％(按重量)，优选约1％～约10％(按重量)的量混入到复合物中。

如以上所讨论，葡萄籽提取物以及葡萄籽提取物与磷脂的复合物也可有利地用于本发明中。得自葡萄籽的提取物包括多元酚混合物，如表儿茶素、原花青素和儿茶素。葡萄籽提取物和磷脂的合适复合物已描述在美国专利No.4,963,527中，其内容引入本文供参考。

当混入复合物中时，葡萄籽提取物或它与磷脂的复合物的存在量为复合物的约0.001％～约5％(按重量)，优选约0.01％～约2.5％(按重量)。可包含与葡萄籽提取物相同的量的绿茶提取物。

类黄酮和生物类黄酮也可用于本发明中。其在Bravo，Polyphenols：Chemistry，Dietary Sources，Metabolism，和Nutritional Significance，Nutrition Reviews，56卷，No.11，317-33(11月，1998)中已经报道，该文章的内容引入本文供参考，类黄酮可以再分成以下所示的13种：

查耳酮

二氢查耳酮

橙酮

黄酮

黄酮醇

二氢黄酮醇

黄烷酮

黄烷醇

黄烷二醇或无色花色素

花青素

异类黄酮

双类黄酮

原花青素或缩合鞣质

类黄酮一般具有二苯基丙烷(C6-C3-C6)的常见结构并且由通过三个碳(通常形成氧化的杂环)连接的两个芳香环组成。基本结构显示如下：

类黄酮偶而以糖苷配基出现在植物中，虽然它们最通常被发现为糖苷衍生物。

用于本发明的特别合适的类黄酮包括但不限于芸香苷、柠檬素、槲皮素、橙皮苷、柚皮苷、紫杉叶素、儿茶素、表儿茶素、圣草酚、柚苷配基、三羟乙基芦丁、白杨黄素、福桔黄素、木犀草素、表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、漆树黄酮、莰非醇、高良姜素、没食子儿茶精、表儿茶素没食子酸酯、芹菜素、洋芫荽黄素、杨梅黄酮、染料木黄酮、大豆黄酮，或它们的衍生物。类黄酮可以从任何合适的来源得到。优选的来源是柑橘属。

当类黄酮混入复合物中时，它们的存在量为复合物的约0.001％～约20％(按重量)，优选约0.01％～约10％(按重量)。

还可包含其它专用组分，如棕榈酰羟丙基三甲基铵支链淀粉。在一个实施方案中，棕榈酰羟丙基三甲基铵支链淀粉可与茶提取物混合。这可以复合物的约0.001％～约2％(按重量)的量存在。

断链剂可包括与以上对于抗羟基自由基组分所述的那些相同的组分。因此，以上抗羟基自由基组分中的一种或多种也可用作断链剂组分。断链抗氧化剂是一旦引发脂质过氧化就能够中断链反应的那些组分。

如上所述，复合物组合物(complex composition)也可包含选择来修复由ROS所引起的损害的组分。在一个实施方案中，本发明的组合物包含提供细胞能量产生的至少一种组分，协助胶原合成的至少一种组分，和/或协助或提供细胞活性的至少一种组分。这些组分可以单独使用，或理想地，组合使用。

合意的细胞能量产生组分包括泛醌。泛醌广泛发现于细菌、真菌、酵母、植物和动物中。已知不同的种类产生具有不同数量的异戊二烯单元(n)的异构形式(isoforms)(Q-n)。例如，异戊二烯单元的数量，在一些微生物中是6(Q6)，在植物中是9(Q9)，在人中是10(Q10)。辅酶Q10或2，3-二甲氧基-5-甲基-6-癸异戊二烯基-苯醌用于恢复和维持呼吸并在细胞活性所需的能量供应方面促进ATP产生。泛醌的衍生物如泛醇也是有用的。

细胞能量产生组分，将例如辅酶Q10，以复合物的约0.001％～约10％，优选约0.01％～约5％(按重量)的量混入复合物中。

为了修复由ROS所引起的损害，希望包含促进胶原合成的组分。已经建议，包括α和β羟基酸在内的醇酸在这方面可能是有用的。结果，本发明考虑包括一种或多种α或β醇酸。合适的例子包括乳酸、苹果酸、乙醇酸、柠檬酸和水杨酸。

另外，已经发现抗坏血酸(维生素C)和它的衍生物促进胶原合成。用于本发明中的抗坏血酸衍生物包括单独或组合的全部对映异构体。优选地，以左旋体提供抗坏血酸。另外，抗坏血酸或它的衍生物可以是水溶性或油溶性的形式。

维生素C(抗坏血酸)衍生物的非排他性例子是，例如，L-抗坏血酸的烷基酯，其中烷基部分具有8到20个碳原子。就酯而言，它们可以选自抗坏血酸的脂肪酸单-、二-、三-或四-酯。例如，此类酯包括但不限于抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸月桂酸酯、抗坏血酸肉豆蔻酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸二月桂酸酯、抗坏血酸二肉豆蔻酸酯、抗坏血酸二硬脂酸酯、抗坏血酸三棕榈酸酯、抗坏血酸三月桂酸酯、抗坏血酸三肉豆蔻酸酯、抗坏血酸三硬酯酸酯、抗坏血酸四棕榈酸酯(四己基癸基抗坏血酸酯)、抗坏血酸四月桂酸酯、抗坏血酸四肉豆蔻酸酯、抗坏血酸四硬脂酸酯、L-抗坏血酸棕榈酸酯、L-抗坏血酸异棕榈酸酯、L-抗坏血酸二棕榈酸酯、L-抗坏血酸异硬脂酸酯、L-抗坏血酸二硬脂酸酯、L-抗坏血酸二异硬脂酸酯、L-抗坏血酸肉豆蔻酸酯、L-抗坏血酸异肉豆蔻酸酯、L-抗坏血酸2-乙基己酸酯、L-抗坏血酸二-2-乙基己酸酯、L-抗坏血酸油酸酯和L-抗坏血酸二油酸酯、四己基癸基抗坏血酸酯；L-抗坏血酸的磷酸酯如L-抗坏血酸-2-磷酸酯和L-抗坏血酸-3-磷酸酯；L-抗坏血酸的硫酸酯如L-抗坏血酸-2-硫酸酯和L-抗坏血酸-3-硫酸酯；它们与碱土金属(如钙和镁)形成的盐。

关于盐，它们可以选自磷酸盐和硫酸盐，优选磷酸盐。抗坏血酸磷酸盐一般选自L-抗坏血酸3-磷酸盐、L-抗坏血酸2-磷酸盐、L-抗坏血酸3-焦磷酸盐和双(L-抗坏血酸3，3-)磷酸盐。优选地，抗坏血酸磷酸盐是抗坏血酸磷酸镁或钠；更优选抗坏血酸磷酸镁。同样地，抗坏血酸硫酸盐一般选自L-抗坏血酸3-硫酸盐、L-抗坏血酸2-硫酸盐、L-抗坏血酸3-焦硫酸盐和双(L-抗坏血酸3，3-)硫酸盐。

胶原合成组分(例如，抗坏血酸和它的衍生物)以复合物的约0.001％～约10％，优选约0.01％～约5％(按重量)的量混入复合物中。

相信类视黄醇可以影响细胞活性，因此将类视黄醇混入本发明的复合物中是合意的。类视黄醇包括视黄醇、视黄醛(维生素A醛)和视黄酯(如乙酸视黄酯、丁酸视黄酯、丙酸视黄酯、辛酸视黄酯、月桂酸视黄酯、棕榈酸视酯、油酸视黄酯和亚油酸视黄酯)。

类视黄醇倾向于刺激皮肤，因此将它们以尽可能减少潜在刺激的量混入到复合物中是合意的。或者，刺激减轻剂可引入到组合物中以协助防止对用户造成的过度不舒适感，同时潜在地允许提高类视黄醇的剂量水平。此类刺激减轻剂包括但不限于神经酰胺类、假神经酰胺类、脂肪酸、胆固醇、磷脂、泛醇、燕麦提取物、尿囊素、银杏、甘草提取物、金盏花、人参、假椴树，等等。

将细胞活性组分例如类视黄醇以复合物的约0.001％～约10％，优选约0.01％～约5％(按重量)的水平混入复合物中。

根据本发明的复合物组合物一般与可药用的或化妆品上可接受的赋形剂或载体混合。可将本发明的复合物组合物配制成溶液、凝胶、奶液、霜剂、软膏、水包油型乳液、油包水乳液或其它可药用的或化妆品上可接受的形式。本发明的复合物组合物还可含有各种已知的常规化妆品组分，只要它们不有害地影响所预期的效果。

可药用的或化妆品上可接受的赋形剂用作在复合物组合物中存在的其它材料用的稀释剂、分散剂或载体，从而当复合物组合物施加于皮肤时促进它们的分配。

除水以外的赋形剂可包括液体或固体润肤剂、溶剂、湿润剂、增稠剂和粉末。例如，下列赋形剂能够单独使用或作为一种或多种的赋形剂的组合使用。

赋形剂还可包括推进剂，如丙烷、异丁烷、二甲醚、二氧化碳、一氧化二氮；和溶剂，如乙醇、异丙醇、丙酮、乙二醇单甲醚、二甘醇单丁醚、二甘醇单乙醚，或粉末，如白垩、滑石、漂白土、高岭土、淀粉、树胶、胶态氧化硅、聚丙烯酸钠、四烷基和/或三烷基芳基铵蒙脱土、化学改性的硅酸铝镁、有机改性的蒙脱土、水合硅酸铝、火成二氧化硅、羧乙烯基聚合物、羧基甲基纤维素钠、硬脂酸乙二醇酯。

润肤剂，如硬脂醇、甘油单蓖麻醇酸酯、貂油、十六烷醇、异硬脂酸异丙酯、硬脂酸、棕榈酸异丁酯、硬脂酸异十六烷基酯、油醇、月桂酸异丙酯、月桂酸己酯、油酸癸酯、十八烷-2-醇、异十六烷基醇、二十烷基醇、山萮醇、十六酸鲸蜡酯、硅氧烷油(如聚二甲基硅氧烷)、癸二酸二正丁酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、硬脂酸丁酯、聚乙二醇、三甘醇、羊毛脂、可可脂、玉米油、棉籽油、橄榄油、棕榈仁油、菜籽油、红花籽油、月见草油、大豆油、向日葵籽油、鳄梨油、芝麻籽油、椰油、花生油、蓖麻油、乙酰化羊毛脂醇、凡士林、矿物油、肉豆蔻酸丁酯、异硬脂酸、棕榈酸、亚油酸异丙酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯、油酸癸酯、肉豆蔻酸肉豆蔻酯。

本文使用的“润肤剂”指用于防止或缓解干燥以及用于保护皮肤的材料。各种各样的合适润肤剂是已知的并且可以用于本文。Sagarin，Cosmetics，Science and Technology，第二版，Vol.1，pp.32-43(1972)，引入本文供参考，含有合适材料的许多例子。

组合物可任选地包含防晒剂，如无机和有机防晒剂以便在本发明的复合物组合物的使用过程中提供保护作用，避免过度暴露于太阳光所造成的有害影响。合适防晒剂的例子包括在the U.S.OTC Sunscreen Monograph中描述的那些，如甲氧基肉桂酸辛酯和丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷，该文献的内容引入本文供参考。

本发明的组合物因此可包含0.1-10％，优选1-5％(按重量)的有机防晒剂材料。

组合物任选还可以包含作为防晒剂的具有1-300nm的平均粒度的二氧化钛或氧化锌，具有1-300nm的平均粒度的氧化铁，具有1-100nm的平均粒度的二氧化硅，例如火成二氧化硅。应该指出的是，当用作本发明的乳液中的组分时，二氧化硅能够提供保护不受红外辐射。

两种形式中的任何一种的超细二氧化钛(即水分散性二氧化钛和油分散性二氧化钛)都可以使用。水分散性二氧化钛是超细二氧化钛，其颗粒是未涂覆的或涂覆有赋予颗粒亲水性表面性能的材料。此类材料的例子包括氧化铝和硅酸铝。油分散性二氧化钛是超细二氧化钛，其颗粒显示出疏水性表面性质，并且为此目的，该颗粒涂覆有金属皂，如硬脂酸铝、月桂酸铝或硬脂酸锌，或涂覆有有机硅氧烷化合物。

“超细二氧化钛”指具有低于100nm，优选10-40nm，最优选15-25nm的平均粒度的二氧化钛颗粒。能任选地混入根据本发明的组合物中的二氧化钛的总量占组合物重量的1-25％，优选2-10％，理想为3-7％。

组合物的特别适宜形式是乳液，在这种情况下油或油质材料(润肤剂)通常与乳化剂一起存在，以得到油包水型乳液或水包油型乳液。

组合物还可包含水，通常至多95％，优选5-95％(按重量)。

组合物还可任选地包含高分子量硅氧烷表面活性剂，其也能够用作乳化剂，代替已提到的任选乳化剂或与该任选乳化剂一起使用。

硅氧烷表面活性剂可以是具有聚氧化乙烯和/或聚氧化丙烯侧链的聚二甲基硅氧烷的高分子量聚合物，分子量为10,000到50,000。当使用时，聚二甲基硅氧烷聚合物便利地以在挥发性硅氧烷中的分散体来提供，该分散体包含例如1-20％(按体积)的聚合物和80-99％(按体积)的挥发性硅氧烷。理想地，分散体由10％(按体积)的分散在挥发性硅氧烷中的聚合物组成。

聚硅氧烷聚合物能够分散在其中的挥发性硅氧烷的例子包括聚二甲基硅氧烷(五聚物和/或六聚物)。

优选的硅氧烷表面活性剂是环状聚甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷共聚醇(copolyol)，如从DOW CORNING商购的DC 3225C FormulationAid。另一种是也可从Dow Corning商购的月桂基聚甲基硅氧烷共聚醇，如DC Q2-5200。

当在组合物中存在时，硅氧烷表面活性剂的量通常是乳液重量的至多25％，优选0.5-15％。

可任选使用的常规助剂的例子包括防腐剂，如对-羟基苯甲酸酯；抗氧化剂，如丁基羟基甲苯；湿润剂，如甘油、乙氧基化甘油如十六烷基聚氧乙烯醚基甘油-26(glycereth-26)、山梨糖醇、2-吡咯烷酮-5-羧酸酯、邻苯二甲酸二丁酯、明胶、聚乙二醇(如PEG 200-600)；缓冲剂连同碱(如三乙醇胺或氢氧化钠)；蜡，如蜂蜡、地蜡、石蜡；植物提取物，如芦荟、矢车菊、金缕梅、接骨木花、黄瓜；以及针叶樱桃发酵产物(fermentate)、增稠剂；活性增强剂；着色剂；和香料，如芳香剂，可包括在本发明所制备的组合物中。化妆品用助剂能够构成该组合物的余量。[0088]也希望混入抗炎药和/或抗刺激药剂。优选天然的抗炎药和/或抗刺激药剂。可以使用例如，甘草和它的提取物，甘草酸二钾盐，燕麦和燕麦提取物，小烛树蜡，α红没药醇，芦荟，Manjistha(从茜草属中的植物(特别是茜草)提取)和Guggal(从没药属中的植物(特别是穆库尔没药)提取)。

可以包括的如上所述的皮肤调理剂是透明质酸，它的衍生物和盐(包括透明质酸钠)，植物提取物如可乐果、巴西可可茶(guarana mate)、藻类提取物、脯氨酸、L-脯氨酸和皮肤有益剂如神经酰胺、甘油神经酰胺、假神经酰胺、神经鞘脂类如鞘磷脂、脑苷脂类、硫酸脑苷酯、和神经节苷脂、鞘氨醇、二氢神经鞘氨醇、植物鞘氨醇、磷脂，单独或以混合物形式。脂肪酸也可与这些皮肤有益剂相组合。例如，神经酰胺和甘油神经酰胺包括描述在美国专利No5,589,178、5,661,118和5,688,752中的那些，所述专利的相关部分引入本文供参考。例如，假神经酰胺包括描述在美国专利No5,198,210，5,206,020和5,415,855中的那些，所述专利的相关公开内容引入本文供参考。

一般地，根据本发明的组合物可以按照本领域已知的常规程序来制备。例如，本发明的各种组分可以通过顺序添加(有或没有优先顺序)来掺混，随后混合形成混合物。例如，水溶性组分通常掺混形成水相，脂溶性组分通常掺混形成油相。其后，两个相可以乳化，然后与载体等掺混。或者，组合物可以通过混合(例如在单釜系统中)来制备。

如上所述，本发明的组合物可以施用于个体，优选局部施用于个体的皮肤上。组合物可以有效抑制自由基、活性氧簇和其它氧化性物质的量施用。显然，个体可以根据它们所希望或相信必要来施用较多或较少的组合物，但是，例如，本发明的组合物能够以约1mg/cm²至约3mg/cm²的量施用于皮肤上。优选以约2mg/cm²/每平方英寸皮肤的用量施用本发明的组合物。一般地，组合物应该每天施用两次，如在早晨和在晚上施用。

组合物优选包含用于增强输送活性组分到皮肤的表皮层和真皮层中的组分。此类组分包括二甲亚砜(DMSO)或正癸基甲基亚砜(NDMS)。

实施例

下列实施例用来举例说明本发明，但不限制本发明。下面的实施例用于说明本发明的组合物的各组分的作用。这些实施例还阐述根据本发明的组合物，与可以另外混入以上所述的组合物当中的任何一种之中的附加任选组分相结合。

实施例1

进行研究，探索样品对于胶原和弹性蛋白合成的作用。两个分析体系用于这些研究。人的真皮成纤维细胞，因为这些细胞积极地合成原胶原，和弹性蛋白。

样品被稀释在介质中。RON SBD 101、积雪草和维生素C是以0.001％、0，01％和0.1％浓度制备的。剩余样品是以0.1％、1％和10％浓度制备的。积雪草是作为在50∶30∶20的DMSO∶乙醇∶水中的提取物制备的。将人的真皮成纤维细胞(Hs-27)置于24孔板中，并孵育过夜。第二天，用前面指出的浓度的样品进行处理细胞。收集上清液，并通过使用商购ELISA试剂盒测试原胶原的存在和通过使用Fastin弹性蛋白试剂盒测试弹性蛋白的存在。

由细胞产生的胶原的量示于图3中。胶原合成表达为所检测到的原胶原的量除以对允许样品的任何有毒影响的存活力所得到的比率。数据表明，积雪草样品以0.1％的浓度在诱导新胶原合成上是最有效的。生物肽(Biopeptide)CL和生物肽EL样品也在10％的浓度下诱导胶原合成的可检测的增加。其它样品对于原胶原合成没有可检测的影响。

图4中的数据显示样品对于弹性蛋白分泌的影响。该数据再次表达为在上清液收集时所分泌的弹性蛋白的量除以细胞的存活力的比率。与它对胶原分泌的有效性相似，积雪草样品是弹性蛋白的最有效的诱导剂。生物肽CL和生物肽EL也诱导弹性蛋白分泌的可检测的增加。最后，Odraline和生物因素(Biodynes)EMPP样品在所使用的最高浓度(10％)下诱导弹性蛋白的轻微增加。

结果表明，积雪草是胶原和弹性蛋白两者的有效诱导剂。另外，结果显示生物肽CL&EL样品同时诱导胶原和弹性蛋白，虽然这些材料的高浓度是为了诱导观察到的生物效应所需要的。

实施例2

对十六个样品测试它们对三种不同酶(基质金属蛋白酶或MMP)的影响，这牵涉到细胞外基质蛋白的断裂。Elhibin是抑制MMP-1的唯一样品。MMP-1的最有效的活化剂是CoQ10、BVOSC抗坏血酸酯、槐碱(Sophorine)、柠檬生物类黄酮、ACTIMP 1.3.9、柠檬和混合柑橘提取物、和Kelpadelpie。大部分的样品对MMP-9无影响，其中仅仅BVOSC抗坏血酸酯是强抑制剂。弹性蛋白酶的最强抑制剂是Collalift、良姜叶(Alphinia leaf)、Elhibin、槐碱、柠檬生物类黄酮、ACTIMP 1.3.9、柠檬和混合柑橘提取物、Kelpadelpie、Extracellium和Colhibin。因此，以MMP-1和弹性蛋白酶抑制的预期轮廓(profile)为基础，尽管对MMP-9无影响，elhibin将是所选择的原材料。

基质金属蛋白酶(MMP)是一组的锌依赖性酶，它在正常和患病的组织中均降解细胞外基质的各种组分。认为MMP-1(间质胶原酶)引发原纤状胶原的劈裂，同时MMP-9(明胶酶)消化由MMP-1产生的变性胶原片段。MMP-9消化的产物然后能够自由引入到新胶原纤维中。弹性蛋白酶分裂弹性蛋白。这些酶的表达是在严格的控制之下并且随着个体年龄变化而改变或暴露于紫外线照射。因为MMP-1涉及到胶原分裂的引发，这对于皮肤护理产物抑制MMP-1活性是有利的。相反，该皮肤护理产物不会抑制MMP-9，因为它将通过阻断胶原构造单元的利用来潜在地抑制新胶原合成。最终，弹性蛋白酶应该被抑制以防止弹性蛋白的消化和皮肤的弹性下降。

下表I中的数据给出了与所测试的每一种样品的来源和溶解度有关的信息。图5中的数据显示了样品对MMP-1活性的影响。Elhibin是抑制MMP-1的唯一样品。图6中的数据显示大部分的样品不抑制MMP-9。对MMP-9具有强抑制活性的唯一样品是BVOSC酯。最后，图7中的数据显示许多样品抑制弹性蛋白酶。这些样品是Collalift、良姜叶、Elhibin、槐碱、ACTIMP 1.3.9、柠檬和混合柑橘提取物、Kelpadelpie、Extracellium和Colhibin。

表I.样品名称、供应商、批号和用于各样品的溶剂。

 

样品	供应商	批号	溶剂
				Collalift Malt提取物	Coletica	03020348	PBS
BVOSC抗坏血酸酯	ABG	11797RYA	DMSO/EtOH/水
				CoQ10	ABG	1190LM5A	DMSO
Alpha-Lupaline	Barnet	982	DMSO
				良姜叶	Barnet	010202	PBS
槐碱	Barnet	5H636	PBS
				Elhibin	Penta pharm	40197/301-02	PBS
柑橘生物类黄酮	ABG	003-01	PBS
				柠檬生物类黄酮	ABG	1084X87A	PBS
ACTIMP 1.3.9	Barnet	105	PBS
				Extracellium	Coletica	02120464	PBS
柠檬提取物	Silab	2-294-1	PBS
				Kelpadelie	未知	104-182	PBS
混合柑橘提取物	Silab	2-179-2-1	PBS
				Colhibin	Pentapharm	404652/325-01	PBS
BAR-TIMP	Barnet	030317	PBS

商购的试剂盒用于测试样品对感兴趣的MMP的活性的影响。对于MMP-1，按照制造商的使用说明书使用得自Amersham的试剂盒。对于MMP-9和弹性蛋白酶，使用从Molecular Probes获得的试剂盒。样品是在表I中所注明的溶剂中在100mg/ml的贮备(stock)浓度下制备的。用PBS将样品稀释到100mg/ml。

实施例3

当暴露于UV光时，皮肤细胞能够产生一氧化氮(NO)，所产生的NO潜在诱导皮肤中与年龄相关的变化。进行这一研究，以便就其对由RAW264.7细胞进行的NO产生的影响来筛选一组化妆品和皮肤护理原材料。鼠巨噬细胞系RAW 264.7用于该研究中，因为已经表明当用LPS刺激时它显示产生NO。

以1×10⁵个细胞/孔的量将鼠RAW 264.7细胞接种在96孔板中。孵育该板过夜。在第二天，用样品在0.001％、0.01％和0.1％的用量下处理细胞2小时。样品列在以下表II中。在暴露期之后，将LPS以100ng/ml的量添加到孔中。该板孵育过夜。将相等体积的培养物上清液和格里斯(Griess)试剂在室温下孵育15分钟，然后读取在540nm处的吸光度。样品中亚硝酸盐的量是从用亚硝酸钠产生的标准曲线计算的。

表II.样品描述

样品                PD-ID           LIMS#           溶剂            外观

Lipochroman-6       E23D92          200300444-      DMSO            浅棕褐色结晶

                                       1                            粉末

Nutriene            1999354700      200300444-      DMSO            棕色、澄明、

Tocotrienols                           2                            粘性的液体

g-生育酚基-醌S      00071319        200300444-      DMSO            棕色、澄明、

                                       3                            粘性的液体

Viapure Citrus      A90/02B00        200300444-      DMS0           浅黄色细粉末

                    1                  4

Soybean             JQ1-124         200300444-      水              澄明棕色液体

Zymbiosome                             5

NAB Pikea           46280            200300444-      水             澄明黄色液体

Robusta                                6

在下表III和图8中示出的数据表明，全部所试验的样品对LPS刺激的RAW细胞上清液中的亚硝酸盐积聚具有抑制效果。样品全部具有抑制活性。

表III.通过用LPS刺激的RAW 264.7细胞所产生的NO。数据显示为ng亚硝酸盐/ml上清液。

 

样品	PD-ID	LIMS#	剂量	产生的亚硝酸盐ng/ml
					阴性对照	NA	NA	NA	0
LPS对照	NA	NA	100ng/ml	901.7
					Lipochroman-6(L6)	E23D92	20030D444-1	0.001、0.01、0.1％	1006.5、750.7、336.7
NutrieneTocotrienols(NT)	1999354700	200300444-2	0.001、0.01、0.1％	804.1、845.7、504
					g-生育醌S(TQS)	00071319	200300444-3	0.001、0.01、0.1％	754.2、830.3、217.9
Viapure Citrus(VC)	A90/02B001	200300444-4	0.001、0.01、0.1％	425.4、391.7、294.9
					SoybeanZymbiosome(SZ)	JQ1-124	200300444-5	0.02、0.2、2.0％	1053.6、834，1、554.8
NAB PikeaRobusta(NPR)	46280	200300444-6	0.01、0.1、1.0％	164、214.9、216.9

结果显示，所有样品对培养物上清液中的亚硝酸盐积聚具有抑制效果。最有效的样品是lipochroman-6、vitapure citrus和g-生育醌S。含水样品Pikea robusta和Soybean Zymbiosome两者都在本实验中显示出抑制性能，当它们在比前一实验中所用的那些浓度更高的浓度下使用时。怀疑在Pikea处理的细胞中见到的高抑制活性归因于稀释误差。最后，似乎表明生育三烯酚类(NT)和合成生育酚(L6)具有比混合生育酚更高的抑制活性。

实施例4

对增进细胞能量的四个新样品测试它们响应积雪草和生物因素(Biodynes)扩增细胞外基质组分产生量的能力。人真皮成纤维细胞用作这些细胞，积极地合成细胞外基质组分。除测量原胶原和弹性蛋白的水平之外，还测量透明质酸的水平。透明质酸是糖胺聚糖家族化合物中的成员。糖胺聚糖构成结缔组织的基础物质，并且与弹性蛋白一起帮助为皮肤提供弹性。它们还保持水，因此提供粘度并水合性能。

将样品稀释在介质中。以0.001％制备积雪草和维生素C。以0.1％制备生物因素EMPP。积雪草是作为在50:30:20的DMSO:乙醇:水中的提取物制备的。“能量增进剂”样品(Seanergilium海藻提取物、Throtaine、Sepitonic和Phytovityl玉米仁提取物)全部是在介质中以0.01、0.1和1.0％制备。将人的真皮成纤维细胞(Hs-27)置于24孔板中，并孵育过夜。在所指定的浓度下用样品处理细胞2个连续日。收集上清液并通过使用商购ELISA试剂盒(分别从Takara和Corgenix获得)测试原胶原和透明质酸的存在，使用Fastin弹性蛋白试剂盒(Biocolor)测试弹性蛋白的存在。

由细胞产生的原胶原的水平示于表IV中。数据表明，能量增进剂样品无一对细胞的原胶原分泌产生积极影响。相反，能量增进剂样品对未刺激和受刺激的细胞的原胶原分泌没有影响或实际上抑制该分泌。唯一的例外是用Seanergilium处理的细胞，它比未处理的阴性对照细胞产生更多的原胶原。

表IV.样品对原胶原分泌的影响。数据表达为从标准曲线计算的ng/ml原胶原/ml上清液，该标准曲线是用ELISA试剂盒提供的原胶原标准品产生的。

 

	对照物	积雪草	生物因素EMPP	维生素C
					基质	1533	1759	1518	1744
Seanergilium	1696	1781	1428	1325
					Siepitonic	1381	1347	1297	1309
Thiotaine	1367	1347	1528	1352
					Phytovityl	1221	1196	965	1055

表V中的数据显示了样品对弹性蛋白分泌的影响。当Sepitonic和Thiotaine是共刺激剂时，发现生物因素EMPP刺激的弹性蛋白分泌的增加。最后，对上清液分析透明质酸的存在。表VI中的数据显示样品对细胞分泌透明质酸的影响。数据表明，Sepitonic和Phytovityl两者都增进了用积雪草和生物因素EMPP刺激的细胞分泌的透明质酸。相反，Seanergilium和Thiotaine两者都抑制透明质酸分泌。

表V.样品对于弹性蛋白分泌的影响。数据表达为通过来自经处理的细胞的组织培养上清液中检测到的弹性蛋白的量除以未处理的对照细胞分泌的弹性蛋白的量所计算的％介质对照弹性蛋白。

 

	对照物	积雪草	生物因素EMPP	维生素C
					基质	100	115	107	148
Seanergilium	107	117	111	112
					Sepitonic	119	110	118	116
Thiotaine	107	107	122	112
					Phytovityl	138	100	110	94

以上表IV显示了样品对于透明质酸分泌的影响。数据表达为ng透明质酸/ml培养物上清液。各上清液中的透明质酸的量是从标准曲线计算的，该标准曲线通过使用ELISA试剂盒提供的透明质酸标准品来产生的。

 

	对照物	积雪草	生物因素EMPP	维生素C
					基质	1112	989	862	633
Seanergilium	694	687	691	789
					Sepitonic	1175	1296	1316	1226
Thiotaine	692	636	743	916
					Phytovityl	1449	1205	1520	943

在本实验中最显著的结果是一些的能量增进样品对于透明质酸分泌的影响。Sepitonic和Phytovityl两者均单独诱导透明质酸。在Sepitonic的存在下由积雪草和生物因素EMPP两者增进了分泌，在Phytovityl的存在下由生物因素EMPP增进分泌。Sepitonic还增强生物因素刺激的弹性蛋白分泌但抑制胶原分泌。另一方面Phytovityl抑制胶原和弹性蛋白两者的分泌。Seanergilium对于任何基质组分的分泌的影响极小，Thiotaine仅仅增强生物因素刺激的弹性蛋白的分泌。总之，由于提供水合、粘度和弹性的透明质酸性能，Sepitonic或Phytovityl材料对于希望增加透明质酸并随后增加水合的皮肤应用是有价值的。

实施例5

经Urlisomes和Merospheres V处理过夜的角质化细胞比未处理的对照细胞具有更高的细胞内脂质水平。看来与Merospheres相比，Urlisomes诱导更高水平的脂质引入，但这归因于在两种产物的脂质浓度上的差异。似乎没有任何非特异性的染色，因为在染色之后、但在萃取染色剂之前，细胞的目测检查显示了多个的细胞内脂质小滴。

干燥是皮肤的刺激性问题，并且它由皮肤水分的损失所引起。保持水的能力与皮肤(特别是在角质层中)的脂质含量有关。因此似乎显得合理的是，如果角质化细胞(角质层中发现的主要细胞类型)中的脂质含量能够提高，则可以防止水分损失并因此减轻干燥皮肤。为了测试这一可能性，对两个含脂质的样品测试它们提高所培养的角质化细胞的脂质水平的能力。

图9中所示的代表性实验的数据表明，细胞暴露于两个样品会导致增大的脂质染色。与Merospheres V相比，Urlisomes对脂质水平有更大的影响。然而，这简单地归因于在两个样品的脂质含量上的差异。或者，该差异能够由与Merosphere V样品相比，更好吸收Urlisome样品中的脂质所导致。

以2×10⁴个/孔将人HEK001细胞置于96孔板并孵育过夜。第二天，将细胞暴露于已经以0.005％、0.05％和0.5％被稀释在细胞培养介质中的样品。再次孵育细胞过夜。第二天，将细胞固定在1％甲醛中。然后用油红(Oil Red)O染料(1)对细胞的脂质染色。在染色之后，结合脂质的染色剂用异丙醇萃取。在515nm处读取所萃取的染色剂的OD。

实施例6

下面是根据本发明的优选组合物的例子。

 

组分
	甲氧基肉桂酸辛酯
阿伏苯宗(Avobenzone)

 

甘油
	泛醇
脯氨酸
	透明质酸钠
甘油(&)卵磷脂(&)神经酰胺3(&)β-谷甾醇
	水(&)迷迭香(迷迭香)叶提取物(&)卵磷脂
大豆(野生大豆)蛋白质
	水解稻米蛋白
向日葵籽提取物
	超氧化物歧化酶
谷胱甘肽
	生育酚
乙酸生育酚酯
	四氢二阿魏酰甲烷
棕榈酰基羟丙基三甲基铵支链淀粉/甘油交联聚合物(crosspolymer)(和)卵磷脂(和)茶提取物
	柚类(葡萄柚)水果提取物
葡萄籽提取物(&)磷脂
	去离子水
聚甲基丙烯酸甘油酯
	丁二醇
十六烷基磷酸钾(&)氢化棕榈酸甘油酯
	花生醇(&)山萮醇(&)二十烷基葡糖苷
PEG-8聚二甲基硅氧烷
	丙烯酸羟乙酯(&)丙烯酰基二甲基牛磺酸钠共聚物(和)角鲨烷(&)失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚硬脂酸酯(Polysorbate60)
苯氧基乙醇(&)对羟基苯甲酸甲酯(&)对羟基苯甲酸乙酯(&)对羟苯甲酸丙酯(&)对羟基苯甲酸丁酯(&)对羟基苯甲酸异丁酯
	EDTA二钠

 

苯氧基乙醇(&)丁基氨基甲酸碘丙炔酯
	芦荟凝胶
生物类黄酮
	苯甲酸C12-15烷基酯&二苯甲酸二丙二醇酯(&)PPG-15硬脂基醚苯甲酸酯
聚二甲基硅氧烷
	抗坏血酸四己基癸酯
Fragrance Camomille Day 451101

实施例6

下面是根据本发明的另一种组合物的例子。

 

组分
	甲氧基肉桂酸辛酯
阿伏苯宗
	甘油
泛醇
	脯氨酸
透明质酸钠
	甘油(&)卵磷脂(&)神经酰胺3(&)β-谷甾醇
水(&)迷迭香(迷迭香)叶提取物(&)卵磷脂
	大豆(野生大豆)蛋白
水解稻米蛋白
	向日葵籽提取物
超氧化物歧化酶
	谷胱甘肽
生育酚
	乙酸生育酚酯
四氢二阿魏酰甲烷
	棕榈酰基羟丙基三甲基铵支链淀粉/甘油交联聚合物(和)卵磷脂(和)茶提取物

 

柚类(葡萄柚)水果提取物
	葡萄籽提取物(&)磷脂
去离子水
	丁二醇
硬脂酸甘油酯(&)PEG100硬脂酸酯
	花生醇(&)山萮醇(&)二十烷基葡糖苷
山萮醇
	十六烷醇
Ozorerite
	丙烯酸羟乙酯(&)丙烯酰基二甲基牛磺酸钠共聚物(和)角鲨烷(&)失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚硬脂酸酯
对羟基苯甲酸甲酯
	EDTA二钠
苄醇
	Chlorphensin
芦荟凝胶
	生物类黄酮
异硬脂酸棕榈酸酯
	角鲨烷
FinSun
	辛酸/癸酸三甘油酯
聚二甲基硅氧烷
	硬脂基甘草酸酯
抗坏血酸四己基癸酯
	Fragrance Camomille Day451101

实施例7

下面也是能够根据本发明的其它实施方案制备的组合物。

 

组分
	甘油

 

泛醇
	脯氨酸
透明质酸钠
	甘油(&)卵磷脂(&)神经酰胺3(&)β-谷甾醇
水(&)迷迭香(迷迭香)叶提取物(&)卵磷脂
	积雪草
水(&)玉米(玉米)籽粒提取物
	掌状海带提取物(&)丁二醇
超氧化物歧化酶
	谷胱甘肽
生育酚
	乙酸生育酚酯
四氢二阿魏酰甲烷
	棕榈酰基羟丙基三甲基铵支链淀粉/甘油交联聚合物(和)卵磷脂(和)茶提取物
柚类(葡萄柚)水果提取物
	葡萄籽提取物(&)磷脂
去离子水
	聚甲基丙烯酸甘油酯
丁二醇
	十六烷基磷酸钾(&)氢化棕榈酸甘油酯
花生醇(&)山萮醇(&)二十烷基葡糖苷
	PEG-8聚二甲基硅氧烷
丙烯酸羟乙酯(&)丙烯酰基二甲基牛磺酸钠共聚物(和)角鲨烷(&)失水山梨醇聚氧乙烯(20)醚硬脂酸酯
	苯氧基乙醇(&)对羟基苯甲酸甲酯(&)对羟基苯甲酸乙酯(&)对羟苯甲酸丙酯(&)对羟基苯甲酸丁酯(&)对羟基苯甲酸异丁基酯
EDTA二钠

 

苯氧基乙醇(&)丁基氨基甲酸碘丙炔酯
	生物类黄酮
乙基己酸C12-C15烷基酯
	泛醌
抗坏血酸四己基癸基酯
	Fragrance Camomille Night 451100

实施例8

下面是能够根据本发明制备的另外的组合物的例子。

 

组分
	甘油
泛醇
	脯氨酸
透明质酸钠
	甘油(&)卵磷脂(&)神经酰胺3(&)β-谷甾醇
水(&)迷迭香(迷迭香)叶提取物(&)卵磷脂
	积雪草
水(&)玉米(玉米)仁提取物
	掌状海带提取物(&)丁二醇
超氧化物歧化酶
	谷胱甘肽
生育酚
	乙酸生育酚酯
四氢二阿魏酰甲烷
	棕榈酰基羟丙基三甲基铵支链淀粉/甘油交联聚合物(和)卵磷脂(和)茶提取物
柚类(葡萄柚)水果提取物
	葡萄籽提取物(&)磷脂
去离子水
	丁二醇

 

硬脂酸甘油酯(&)PEG100硬脂酸酯
	花生醇(&)山萮醇(&)二十烷基葡糖苷
山萮醇
	十六烷醇
卡波姆980(Carbomer980)
	三乙醇胺
重氮烷基咪唑脲(diazolidinyl urea)(和)丁基氨基甲酸碘丙炔酯(替代R4161)
	苯氧基乙醇
芦荟凝胶
	生物类黄酮
棕榈酸异硬脂基酯
	角鲨烷
苯甲酸C12-15烷基酯&二苯甲酸二丙二醇酯(&)PPG-15硬脂基醚苯甲酸酯
	辛酸/癸酸三甘油酯
聚二甲基硅氧烷
	泛醌
抗坏血酸四己基癸基酯
	Fragrance Camomille Night 451100

实施例9

下面是根据本发明的一个实施方案的局部皮肤用组合物。除非另有说明，否则，对于每一个下列实施例，百分数按重量计。

 

组分	Wt.％
		去离子水	56.595
抗超氧化物组分(超氧化物歧化酶)	0.005
		抗过氧化氢组分(谷胱甘肽)	0.2
抗羟基自由基组分(乙酸生育酚酯)	1.0
		抗羟基自由基组分(生育酚)	0.2

 

抗羟基自由基组分(四氢二阿魏酰甲烷)	0.1
		抗羟基自由基组分(葡萄籽提取物(与)磷脂)	0.1
抗羟基自由基组分(生物类黄酮)	0.1
		抗羟基组分(棕榈酰基羟丙基三甲基铵支链淀粉/甘油交联聚合物(和)卵磷脂(和)茶提取物)	0.1
润肤剂	21.5
		湿润剂	5.205
乳化剂	2.3
		皮肤调理剂	0.1
防晒剂(UVA)	3.0
		防晒剂(UVB)	7.5
增稠剂	0.3
		pH调节剂	0.3
防腐剂	1.25
		香料	0.1500
总量	100.000

实施例10

下面是根据本发明的一个实施方案的局部皮肤用组合物。在这一实施方案中，组合物提供针对ROS的防护作用并且还包含有助于修复由ROS引起的损伤的组分。

 

组分	Wt％
		去离子水	57.635
抗超氧化物组分(超氧化物歧化酶)	0.005
		抗过氧化氢组分(谷胱甘肽)	0.2
抗羟基自由基组分(乙酸生育酚酯)	1.0
		抗羟基自由基组分(生育酚)	0.2
抗羟基自由基组分(四氢二阿魏酰甲烷)	0.1
		抗羟基自由基组分(葡萄籽提取物(与)磷脂)	0.1
抗羟基自由基组分(生物类黄酮)	0.1

 

抗羟基组分(棕榈酰基羟丙基三甲基铵支链淀粉/甘油联聚合物(和)卵磷脂(和)茶提取物)	0.1
		细胞活性组分(乙酸视黄酯)	0.16
细胞能量产生组分(泛醌)	0.05
		胶原合成组分(四己基癸基抗坏血酸酯)	0.1
润肤剂	26.5
		湿润剂	5.3
乳化剂	2.3
		皮肤调理剂	0.1
二氧化硅(12微米)	2.0
		二氧化硅(3微米)	2.0
芦荟凝胶	1.0
		增稠剂	0.3
pH调节剂	0.3
		防腐剂	0.3
香料	0.150
		总量	100.00

实施例11

[00100]下面是根据本发明的一个实施方案的局部皮肤用组合物。在这一实施方案中，组合物提供针对ROS的防护作用并且还包含有助于修复由ROS引起的损伤的组分。

 

组分	Wt.％
		去离子水	66.68
抗超氧化物组分(超氧化物歧化酶)	0.005
		抗过氧化氢组分(谷胱甘肽)	0.2
抗羟基自由基组分(乙酸生育酚酯)	1.0
		抗羟基自由基组分(生育酚)	0.2
抗羟基自由基组分(四氢二阿魏酰甲烷)	0.1

 

抗羟基自由基组分(葡萄籽提取物(与)磷脂)	0.1
		抗羟基自由基组分(生物类黄酮)	0.1
抗羟基自由基组分(棕榈酰基羟丙基三甲基铵支链淀粉/甘油交联聚合物(和)卵磷脂(和)茶提取物)	0.1
		细胞活性组分(乙酸视黄酯)	0.16
细胞能量产生组分(泛醌)	0.05
		胶原合成组分(四己基癸基抗坏血酸酯)	0.1
润肤剂	1
		湿润剂	1.65
乳化剂
		皮肤调理剂	0.1
增稠剂	0.2
		pH调节剂
防腐剂	0.3
		香料	0.15
环状聚甲基硅氧烷	10.00
		聚甲基丙烯酸甘油酯	10.00
聚二甲基硅氧烷共聚醇	2.00
		12微米二氧化硅	2.00
3微米二氧化硅	2.00
		聚丙烯酰胺(和)C13-14异链烷烃(和)月桂基醚-7	1.00
聚山梨酸酯20(Polysorbate 20)	0.50
		总量	100.00

实施例12

进行下面试验来测定提供根据本发明的复合物组合物的效果，与安慰剂、维生素E和维生素C对比。通过在人的背上描绘多个的两英寸节段来进行试验。下列配制剂以随机方式施用于这些节段。

 

	Wt％	Wt％	Wt.％	Wt.％
					组分	A	B	C	D
润肤剂	21.5	21.5	21.5	21.5
					湿润剂	6.205	6.205	6.205	6.205
乳化剂	1.3	1.3	1.3	1.3
					皮肤调理剂	0.1	0.1	0.1	0.1
增稠剂	0.3	0.3	0.3	0.3
					pH调节剂	0.3	0.3	0.3	0.3
防腐剂	1.25	1.25	1.25	1.25
					香料	0.15	0.15	0.15	0.15
生育酚		1.2000		0.2000
					谷胱甘肽				0.2000
四氢二阿魏酰甲烷				0.1000
					葡萄籽				0.1000
提取物(与)磷脂
					生物类黄酮				0.1000
棕榈酰基羟丙基三甲基铵支链淀粉/甘油交联聚合物(和)卵磷脂(和)茶提取物				0.1000
					超氧化物歧化酶				0.0050
透明质酸钠	0.0005	0.0005	0.0005	0.0005
					抗坏血酸			10.000
水	QS	QS	QS	QS

施用以上配制剂之后，使背经受紫外线辐射，测量皮肤红斑。

图1和2显示了结果。

应理解，能够对以上所述的实施方案进行各种各样的改变和改进。因此前面的叙述意在举例说明本发明而不是限制本发明，由所附权利要求(包括所有等同技术方案)定义本发明的范围。

Claims (9)

1.组合物，它包含迷迭香组分、卵磷脂、神经酰胺组分、谷甾醇组分、甘油、泛醇、脯氨酸组分和透明质酸盐组分。

2.根据权利要求1的组合物，其中所述迷迭香组分是迷迭香提取物。

3.根据权利要求1的组合物，其中所述神经酰胺组分是神经酰胺3。

4.根据权利要求1的组合物，其中所述谷甾醇组分是β-谷甾醇。

5.根据权利要求1的组合物，其中所述透明质酸盐组分是透明质酸钠。

6.根据权利要求1的组合物，其中所述迷迭香组分是迷迭香提取物，所述神经酰胺组分是神经酰胺3，所述谷甾醇组分是β-谷甾醇以及所述透明质酸盐组分是透明质酸钠。

7.包含迷迭香提取物和卵磷脂的组合物。

8.包含卵磷脂、神经酰胺3和β谷甾醇的组合物。

9.抑制自由基、活性氧簇或活性氮簇的方法，该方法包括局部施用有效量的组合物，该组合物包含迷迭香组分、卵磷脂、神经酰胺组分、谷甾醇组分、甘油、泛醇、脯氨酸组分和透明质酸盐组分。

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