DE4228023A1 - Immobilised mushroom starter cultures - comprising hyphae, spores and/or mycelia in polymer matrix contg. filter - Google Patents
Immobilised mushroom starter cultures - comprising hyphae, spores and/or mycelia in polymer matrix contg. filterInfo
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Abstract
Description
Die Kultivierung von Speisepilzen stellt seit Jahrzehnten einen bedeutenden Wirtschaftszweig dar. Da die natürlichen Waldpilze auf Grund zu geringer Sammeltätigkeit den Bedarf an Speisepilzen bei weitem nicht decken, gewinnt die Frage der Kultivierung von Pilzen als Nahrungsmittel immer größere Bedeutung. Ferner sind Waldpilze in neuerer Zeit stark mit Schwermetallen und radioaktiven Nukliden belastet, so daß in vielen Fällen von einem Verzehr abzuraten ist. Die kontrollierte Zucht von Speisepilzen auf schwermetallarmen sowie nicht radioaktiv belasteten Substraten wird immer bedeutsamer. Bedingt durch diese Einflüsse werden in letzter Zeit vermehrt Speisepilze im industriellem Maßstab sowie im Haus und Garten kultiviert. Dabei werden biologisch abbaubare Materialien wie z. B. Hölzer oder Strohballen mit Speisepilzstarterkulturen, sogenannten Pilzbrutsubstraten beimpft. Bei diesen handelt es sich gemäß dem Stand der Technik um ein mit Pilzhyphen durchwachsenes Animpfmaterial, das in kleinen Stücken in Bohrungen bzw. Einschnitten von Holzstämmen oder Strohballen eingebracht wird. Ausgehend von diesen Impfstellen besiedelt der Pilz das Substrat saprophytisch. Die derzeit gebräuchlichen Pilzbrutsubstrate gemäß dem Stand der Technik, werden aus Getreidekörnern (z. B. Hirse, Weizen, Roggen) gewonnen, die evtl. mit Strohhäcksel, pH- Wert korrigierenden Zusätzen, wie z. B. Calciumcarbonat, versetzt werden. Die Getreidekörner werden durch Sieden in Wasser vollständig gequollen, von über schüssigem Wasser durch Abtropfen befreit, mit den anderen zuvor genannten Zusätzen vermischt, in Kleingebinde (1-10 Liter) abgefüllt. Diese Kleingebinde werden anschließend durch Autoklavieren bei 121°C und 1,21 bar (Absolutdruck) Heißwasserdampf sterilisiert. Bedingt durch das Gebindevolumen kann dieser Autoklavierschritt bis zu mehrere Stunden benötigen, um die erforderliche Sterilisationstemperatur von 121°C, auch im Inneren, mindestens 30 Minuten zu erreichen. Nach einer Abkühlphase der Gebinde unter sterilem Druckausgleich werden diese meist mit einer Mycelsuspension unter Sterilbedingungen beimpft. Anschließend wird in einem Brutraum, bei der für den Pilzstamm optimalen Wachstumstemperatur, bis zum "Durchwachsen" der Brut gelagert. Nach der Durchwachs phase wird bis zur Verwendung bei Temperaturen zwischen +4-+10°C gelagert.The cultivation of mushrooms has been an important one for decades Economic branch. Because the natural forest mushrooms due to insufficient collecting activity The question of the cultivation of Mushrooms are becoming increasingly important as food. Furthermore, forest mushrooms are more recent heavily contaminated with heavy metals and radioactive nuclides, so that in many cases of is not advisable for consumption. The controlled cultivation of mushrooms low-metal and non-radioactive substrates are becoming increasingly important. Due to these influences, edible mushrooms have been growing in industrial scale as well as cultivated in the house and garden. Biodegradable materials such. B. woods or straw bales Inoculated edible starter cultures, so-called mushroom brood substrates. According to the prior art, these are fungus hyphae mixed inoculation material, which is in small pieces in bores or incisions from logs or straw bales. Starting from these vaccination sites, the fungus saprophytically colonizes the substrate. The currently used mushroom brood substrates according to the prior art are made from Grain grains (e.g. millet, wheat, rye) are obtained, which may be with chopped straw, pH Value correcting additives such as As calcium carbonate can be added. The cereal grains are completely swollen by boiling in water, from over freed water by dripping, with the other additives mentioned above mixed, filled in small containers (1-10 liters). These small containers are then sterilized by autoclaving at 121 ° C and 1.21 bar (absolute pressure) hot water steam. Due to the container volume, this autoclaving step can take up to several hours need the required sterilization temperature of 121 ° C, even inside, to reach at least 30 minutes. After cooling the container under sterile These are usually equalized with a mycelium suspension under sterile conditions inoculates. Then in a brood chamber, the optimal for the mushroom strain Growth temperature, stored until the brood "grows through". After the growth phase is stored at temperatures between + 4- + 10 ° C until use.
- 1) Technologie der Pilzverwertung, Bötticher, Werner; 1974 Eugen Ulmer, Stuttgart.1) Technology of mushroom utilization, Bötticher, Werner; 1974 Eugen Ulmer, Stuttgart.
- 2) Pilzanbau, Biotechnologie der Kulturspeisepilze, Prof. Dr. Jan Lelley, Stuttgart: Ulmer, 1991.2) Mushroom cultivation, biotechnology of cultivated mushrooms, Prof. Dr. Jan Lelley, Stuttgart: Ulmer, 1991.
Das gemäß dem Stand der Technik beschriebene Herstellungsverfahren bzw. die daraus resultierende Starterkulturen weisen folgende Nachteile auf:The manufacturing method described in accordance with the prior art or the one derived therefrom resulting starter cultures have the following disadvantages:
- 1) Die Oberfläche von Getreidekörnern, ist bedingt durch den nativen Ursprung, stark mit anderen unerwünschten Keimen (Bakterien, Dauersporen von Schimmelpilzen) kontaminiert. Dadurch sind lange Sterilisationszeiten erforderlich, um Keimfreiheit zu erzielen.1) Due to the native origin, the surface of cereal grains is strongly influenced by other unwanted germs (bacteria, permanent spores of mold) contaminated. As a result, long sterilization times are required to achieve sterility.
- 2) Siedezeiten für das Quellen der Körner und die verlängerten Sterilisationszeiten führen zu einer Zerstörung der in den Ausgangsmaterialien vorhandenen thermolabilen Wachstumsfaktoren wie Vitaminen. Von zahlreichen Pilzstämmen ist bekannt, daß sie essentiell von der Zufuhr von Vitaminen als Wuchsfaktoren abhängig sind.2) Lead boiling times for the swelling of the grains and the extended sterilization times to destroy the thermolabile present in the starting materials Growth factors such as vitamins. Numerous strains of mushrooms are known to: are essentially dependent on the intake of vitamins as growth factors.
- 3) Lange Siede- und Sterilisationszeiten sind durch den hohen Energiebedarf kostenintensiv.3) Long boiling and sterilization times are costly due to the high energy requirement.
- 4) Die Korngröße und der Feuchtigkeitsgehalt ist nicht exakt steuerbar.4) The grain size and moisture content cannot be precisely controlled.
- 5) Die Getreidekörner der Pilzbrutsubstrate, entsprechend dem Stand der Technik, sind intensiv mit Pilzmycel verwachsen. Beim Erhitzen sondern Getreidekörner in Lösung gegangene Polysaccharide aus, die nach dem Abkühlen hochviskose Pasten oder Gele bilden. Diese Gelzwischenräume werden dann ebenfalls von Pilzhyphen besiedelt. Nach der Durchwachsphase resultiert so eine kompakte, nicht rieselfähige Masse. Trotz mechanischer Zerkleinerung vor der Anwendung ist die Pilzbrut brockig, stark verklumpt. Durch das mechanische Zerkleinern und das spätere erschwerte Einbringen der Starterkultur in Bohrungen von Holzstämmen werden Konkurrenzmikroorganismen eingeschleppt, die an den verwandten Werkzeugen sowie an den Händen haften. Die eingebrachte Starterkultur wird von diesen unerwünschten Mikroorganismen zerstört. Meist ist der Verlust des gesamten Holzstammes und ein Ernteausfall die Folge.5) The cereal grains of the mushroom brood substrates are, according to the state of the art ingrown with mushroom mycelium. When heated, cereal grains are in solution gone polysaccharides, which, after cooling, become highly viscous pastes or gels form. These gel spaces are then also populated by fungal hyphae. After The growth phase results in a compact, non-free-flowing mass. Despite mechanical crushing before use, the mushroom brood is chunky, strong clumped. Due to the mechanical crushing and the later difficult introduction of the Starter culture in bores from logs becomes competitive microorganisms introduced, which adhere to the related tools and hands. The introduced starter culture is from these undesirable microorganisms destroyed. Most of the time, the loss of the entire log and a crop failure is the result.
- 6) Die Nährstoffzusammensetzung sowie das Nährstoffangebot kann nicht variiert werden, da von nativen Körpern ausgegangen wird.6) The nutrient composition and the nutrient supply cannot be varied because is assumed from native bodies.
- 7) Wuchsfördernde oder biocide Zusätze können nicht in das Innere des nativen Körpers gebracht werden. Ihr Zusatz beschränkt sich auf die Oberfläche der Getreidekörner. Ein Zusatz während des Koch-Schrittes kann wegen der Thermolabilität dieser Stoffe nicht erfolgen.7) Growth enhancing or biocidal additives cannot get inside the native body to be brought. Their addition is limited to the surface of the cereal grains. A Addition during the cooking step cannot because of the thermolability of these substances respectively.
Seit einigen Jahren sind in der Literatur die verschiedensten Verfahren zum Immobilisieren von Zellen (Bakterien, Pilzen, Pflanzenzellen) beschrieben worden. So z. B. in:A variety of immobilization methods have been in the literature for several years of cells (bacteria, fungi, plant cells) have been described. So z. B. in:
- - Präve, Paul; Handbuch der Biotechnologie, 1984, München; S. 454 ff.- Präve, Paul; Handbuch der Biotechnologie, 1984, Munich; P. 454 ff.
- - Woodward, J.; Immobilised cells and enzymes. 1985, IRL Press Limited, Oxford.- Woodward, J .; Immobilized cells and enzymes. 1985, IRL Press Limited, Oxford.
In zunehmendem Maße finden immobilisierte Starterkulturen in der Lebensmittelbe- und verarbeitung Anwendung, so z. B. in der Essigsäuregärung sowie in der industriellen Sektherstellung, bei der alginateingehüllte Hefezellen zur Anwendung gelangen. (Siehe: Swiss Biotech, Vol. 7(1989) Nr. 3, S. 17-20; "Biotechnologie mit immobilisierten Biokatalysatoren").Immobilized starter cultures are increasingly being found in food and beverages processing application, e.g. B. in acetic acid fermentation and in industrial Sparkling wine production using alginate-encased yeast cells. (See: Swiss Biotech, Vol. 7 (1989) No. 3, pp. 17-20; "Biotechnology with immobilized Biocatalysts ").
Das hierbei gebräuchlichste Einbettungsverfahren ist die Alginateinhüllung. Hierbei werden die Mikroorganismen mit löslichem Natriumalginat gemischt und mittels einer Spritzapparatur in eine calciumionenhaltige Lösung getropft, in der die Tropfen nach dem Prinzip der ionotropen Gelbildung härten und kugelförmige Körper bilden. Vorteile dieser Methode liegen in der geringen Toxizität der Materialien sowie der einfachen Handhabung. Nachteile bei diesem Verfahren liegen in der geringen mechanischen Stabilität der Einschlußkörper. Diese macht sich bei großen Packvolumina und hohen Strömungsgeschwindigkeiten des Nährmediums bemerkbar.The most common embedding process is the alginate encapsulation. Here, the microorganisms are mixed with soluble sodium alginate and by means of a Spray apparatus dripped into a solution containing calcium ions, in which the drops after the Harden principle of ionotropic gel formation and form spherical bodies. The advantages of this method are the low toxicity of the materials and the easy handling. Disadvantages with this method are the low mechanical stability of the inclusion body. This is the case with large packing volumes and high flow rates of the nutrient medium are noticeable.
Die in der Literatur beschriebenen Alginateinbettungsverfahren gehenThe alginate embedding processes described in the literature go
- a) von hohen einzubettenden Zelldichten bzw. Zellzahlen in der Regel 5 g Feuchtzellmasse pro 100 g Alginat unda) of high cell densities or cell numbers to be embedded, generally 5 g of wet cell mass per 100 g alginate and
- b) von wäßrigen Systemen aus, in denen der Einschlußkörper hergestellt wird und in denen er auch für die spätere Verwendung verbleibt.b) from aqueous systems in which the inclusion body is produced and in which it also remains for later use.
Ziel derartiger Verfahren ist die Gewinnung extrazellulär ausgeschütteter Metabolite wie z. B. Antibiotica, Enzyme, bzw. die Biotransformation von dem Medium zugesetzter Verbindungen. Eine Biomassenbildung ist unerwünscht, da die auswachsenden Zellen in das Kulturmedium gelangen und anschließende Aufarbeitungsprozesse erschweren. The aim of such processes is the extraction of extracellularly released metabolites such as e.g. B. antibiotics, enzymes, or the biotransformation of the medium added Links. Biomass formation is undesirable because the growing cells in the culture medium arrive and complicate subsequent processing processes.
Zahlreiche in der Patentliteratur beschriebene Verfahren verfolgen das Ziel, durch nach trägliche Oberflächenbeschichtung des Einschlußkörpers ein Auswachsen der Zellen zu vermeiden sowie in strömenden Medien dimensionsstabile Körper zu erzielen.Numerous methods described in the patent literature pursue the goal by inert surface coating of the inclusion body to a growth of the cells avoid and to achieve dimensionally stable bodies in flowing media.
Werden geringe Zelldichten bzw. Zellmassen in ein ionotropes Gel, gemäß dem Stand der Technik, z. B. in ein Alginatgel eingeschlossen und die erhaltenen Einschlußkörper aus dem Medium entfernt, so schrumpfen die Körper unter Aussonderung von Flüssigkeit (Siehe Tabelle 1 an den Beispielen 1 und 2). Eine der Hauptursachen liegt in der geringen Zelldichte des Einschlußkörpers. Hohe Zell dichten verstärken das ionotrope Netzwerk. Eine Schrumpfung unter Flüssigkeitsaustritt unterbleibt.Are low cell densities or cell masses in an ionotropic gel, according to the state of the Technology, e.g. B. enclosed in an alginate gel and the inclusion bodies obtained from the If the medium is removed, the body shrinks and liquid is separated (See Table 1 on Examples 1 and 2). One of the main causes is the low cell density of the inclusion body. High cell densities reinforce the ionotropic network. Shrinkage under fluid leakage is omitted.
Liegen jedoch geringe Zelldichten vor, so schrumpft der Körper bis zum Erreichen eines physikalisch stabilen Zustandes. Dieses Schrumpfen tritt schon während der Härtungsphase im Fällungsbad in Erscheinung, erkennbar an der geringen Fällungsmassenausbeute Einschlußkörper. Eine Verdopplung der Konzentration an Gelbildner bewirkt nur eine geringfügige Verbesserung der Ausbeute. Beispiel 2 der Tabelle 1 weist im Vergleich zu Beispiel 1 eine doppelt so hohe Konzentration an Gelbildner auf. Die Fällungsmassenausbeute vor der Lagerung konnte jedoch nur von 49,7% auf 62,4% gesteigert werden.However, if there are low cell densities, the body shrinks until it reaches one physically stable condition. This shrinkage occurs during the hardening phase Appearance in the precipitation bath, recognizable by the low precipitation mass yield Inclusion body. Doubling the concentration of gelling agent only does one slight improvement in yield. Example 2 of Table 1 compares to Example 1 has twice the concentration of gelling agent. The precipitation mass yield before storage could only be reduced from 49.7% to 62.4% be increased.
Wie aus Beispiel 1 und 2 der Tabelle 1 deutlich erkennbar ist, tritt während der Lagerung ein weiterer Verlust an Flüssigkeit auf, bedingt zum einen durch die geringe Dimensionsstabilität, zum anderen durch die Freilegung der Oberfläche des Einschlußkörpers. Geringfügige Temperaturschwankungen während der Lagerung bewirken die Bildung von Schwitzwasser an der Wandung des Lagergefäßes. Zufolge eines dynamischen Gleichgewichtes im Lagergefäß verdunstet Wasser an der Oberfläche des Körpers und kondensiert an der Behälterwandung bzw. in dem sich bildenden Flüssigkeitssumpf. Das gebildete Flüssigkeitsvolumen bedeckt dann einen Großteil des Starterkulturvolumens. Wie aus Tabelle 2 am Beispiel 1 und 2 zu ersehen ist, findet unterhalb der Flüssigkeitsoberfläche kein Mycelwachstum statt.As can clearly be seen from Examples 1 and 2 of Table 1, occurs during storage a further loss of fluid due to the low level Dimensional stability, on the other hand through the exposure of the surface of the Inclusion body. Cause slight temperature fluctuations during storage the formation of condensation on the wall of the storage vessel. Due to a dynamic equilibrium in the storage vessel, water evaporates at the Surface of the body and condenses on the container wall or in which forming liquid sump. The volume of liquid formed then covers one Most of the starter culture volume. As can be seen from Table 2 using Examples 1 and 2, below the Liquid surface no mycelial growth takes place.
Des weiteren tritt durch das Schrumpfen eine Verklebung der Körper ein. Die Rieselfähigkeit geht verloren, wie Beispiel 1 und 2 der Tabelle 2 zeigt. The shrinkage also causes the bodies to stick together. The flowability is lost, as shown in Examples 1 and 2 of Table 2.
Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine leicht handhabbare Starterkultur herzustellen, die eine ausgezeichnete Lagerstabilität aufweist.The present invention has for its object an easy to handle To produce starter culture that has excellent storage stability.
Gegenstand dieser Erfindung ist ein Immobilisat von Speisepilzen in einer Gelmatrix unter Zusatz von gasgefüllten, porösen Stütz- bzw. Füllsubstanzen. Überraschenderweise zeigte dieses Immobilisierungsverfahren auch die Vorteile, daß die für das Wachstum der Pilzzellen benötigten Nährstoffe in ihrer Art und Konzentration leicht variierbar sind. Zum anderen lassen sich auch weitere Zusätze wie z. B. Wachstumsfaktoren oder Biocide in das Innere der Einschlußkörper einlagern.The object of this invention is to immobilize edible mushrooms in a gel matrix with the addition of gas-filled, porous support or filling substances. Surprisingly, this immobilization process also showed that Advantages that the nutrients required for the growth of the fungal cells in their Type and concentration are easily variable. On the other hand, there are also Additives such as B. growth factors or biocides inside the inclusion body store.
Erfindungsgemäß als Speisepilz bezeichnete Pilze finden sich in der Gruppe der Eumycota [Echte Pilze]. Typische Vertreter sind vorzugsweise saprophytisch lebende Arten der Unterabteilung Basidiomycotina [Ständerpilze]. Wenn also im Rahmen dieser Erfindung vereinfacht von Speisepilzen die Rede ist, dann sind stets die hier beschriebenen gemeint.Fungi designated according to the invention as edible mushrooms can be found in the group of Eumycota [real mushrooms]. Typical representatives are preferably saprophytic species the Basidiomycotina subdivision. So if within the scope of this invention in simplified terms of edible mushrooms, we always mean those described here.
Bei der Zucht von saprophytisch lebenden Speisepilzen geht man von einer Vielzahl biologisch abbaubarer d. h. für den Pilz verwertbarer Materialien aus, meist Pflanzenmaterial unterschiedlicher Art. Wenn im Rahmen dieser Erfindung vereinfacht von biologisch abbaubaren Materialien die Rede ist, so bezieht sich dieser Begriff auf alle vom pilzlichen Stoffwechsel verwertbaren Materialien.When growing saprophytic edible mushrooms, there are many biodegradable d. H. for the mushroom of usable materials, mostly Plant material of different types. If simplified in the context of this invention of biodegradable materials, this term refers to all materials usable by the fungal metabolism.
Erfindungsgemäß eignen sich zum Immobilisieren Pilzhyphen, Hyphenverbände oder Mycel aggregate. Gewöhnlich wird das Mycel in einer Oberflächenkultur gewonnen und anschließend durch mechanisches Zerkleinern in die einzelnen Verbände getrennt. Typische Verfahren zur Gewinnung der Biomasse sind aber auch die submerse Schüttelkultur. Ferner eignen sich auch Sporen, die von adulten Fruchtkörpern gewonnen werden, zum Immobilisieren.According to the invention, fungal hyphae, hyphal bandages or mycelium are suitable for immobilization aggregates. The mycelium is usually obtained in a surface culture and then separated into the individual dressings by mechanical crushing. Typical processes for the extraction of biomass are also submerged Shake culture. Spores obtained from adult fruiting bodies are also suitable become immobilized.
Die so gewonnene feinteilige Hyphensuspension wird in einer Polymermatrix unter Zusatz von Stütz- bzw. Füllstoffen sowie gegebenenfalls von Nährstoffen und Biociden immobilisiert. Im erfindungsgemäß bevorzugten Herstellungsverfahren wird die Hyphensuspension nach dem Prinzip der ionotropen Gelbildung immobilisiert. The finely divided hyphus suspension obtained in this way is added to a polymer matrix of support and fillers as well as, where appropriate, of nutrients and biocides immobilized. In the production process preferred according to the invention, the hypha suspension is subsequently immobilized on the principle of ionotropic gel formation.
Dabei nutzt man die Eigenschaft anionischer Polymere mit mehrwertigen Kationen ionische Gele zu bilden. Erfindungsgemäß wird die Hyphensuspension mit der Polymerlösung gemischt, die weiteren Komponenten wie Nährstoffe, Füllsubstanzen und Biocide zugesetzt, und diese Mischung in eine Lösung des mehrwertigen Kations, im Falle der Alginat einhüllung eine calciumionenhaltige Lösung, getropft. Zur vollständigen Härtung der entstehenden, meist kugelförmigen Einschlußkörper verbleiben diese mehrere Stunden im Fällbad. Anschließend werden diese entnommen und können nach einer evtl. Bebrütungsphase zur Anwendung gelangen.The property of anionic polymers with multivalent cations ionic is used To form gels. According to the invention, the hypha suspension is mixed with the polymer solution which added to other components such as nutrients, fillers and biocides, and this mixture in a solution of the polyvalent cation, in the case of the alginate enveloping a solution containing calcium ions, dropped. For the complete hardening of the resulting, mostly spherical inclusion bodies these remain in the precipitation bath for several hours. They are then removed and can be used after an incubation phase apply.
Als Polymermatrix geeignete Verbindungen müssen bei Raumtemperatur und Bebrütungstemperatur ein stabiles Gel bilden. Ferner müssen die eingesetzten Verbindungen für den jeweiligen Pilzstamm atoxisch sein und dürfen sein Wachstum und seine genetische Stabilität nicht beeinflussen. Erfindungsgemäß haben sich als organische Polymermatrix natürliche Polymere wie Cellulose und Cellulosederivate, Stärke und Stärkederivate, Dextrane, Agar-Agar, Protein gele, Agarose, ionotrope Gele aus Carageenan mit Kaliumionen und Guar-Mehl bewährt. Bevorzugterweise eignet sich jedoch ein ionotropes Gel aus Alginsäuresalzen mit Calciumionen. Ferner können auch anorganische Gele wie z. B. aus Silicium- und / oder Alumiunium- und/oder Titan-Hydroxyden dienen. Die Polymermatrix muß für den Pilz durchdringbar sein, damit ein vollständiger Bewuchs der Oberfläche erfolgen kann. Von diesem Oberflächenbewuchs erfolgt dann bei der Anwendung die Besiedlung der biologisch abbaubaren Materialien.Compounds suitable as polymer matrix must be at room temperature and Incubation temperature form a stable gel. Furthermore, the used Compounds for the respective mushroom strain can be atoxic and its growth and does not affect its genetic stability. According to the invention, natural polymers such as Cellulose and cellulose derivatives, starch and starch derivatives, dextrans, agar-agar, protein gels, agarose, ionotropic gels from carageenan with potassium ions and guar flour have proven their worth. However, an ionotropic gel composed of alginic acid salts is preferably also suitable Calcium ions. Furthermore, inorganic gels such as. B. from silicon and / or aluminum and / or titanium hydroxides are used. The polymer matrix must be penetrable by the fungus so that the vegetation is completely covered Surface can be done. This surface growth then occurs at Application of the settlement of the biodegradable materials.
Wie es sich zeigte neigen die angeführten Polymergele bei der Lagerung zur Aussonderung von Flüssigkeit. Dieser Effekt tritt besonders stark bei geringen immobilisierten Zellzahlen in Erscheinung. Der erfindungsgemäß genannten Speisepilzstarterkultur müssen gerüstbildende Füllstoffe beigemischt werden. As it turned out, the polymer gels listed tend to be separated out during storage of liquid. This effect occurs particularly strongly with low immobilized Cell numbers in appearance. The edible starter culture mentioned according to the invention must contain scaffolding fillers be added.
Überraschenderweise erwiesen sich nur gasgefüllte, poröse Materialien mit einer Dichte zwischen 0,1 kg/l und 3,0 kg/l als geeignet, vorzugsweise amorphe, poröse, gasgefüllte, wasserunlösliche Aluminium-Alkalimetall- Erdalkalimetall-Silikat-Aggregate mit einer Dichte zwischen 0,1 kg/l und 3,0 kg/l. Die übliche Teilchengrößenverteilung liegt zwischen 0,001 bis 0,5 mm.Surprisingly, only gas-filled, porous materials with a density were found between 0.1 kg / l and 3.0 kg / l as suitable, preferably amorphous, porous, gas-filled, water-insoluble aluminum alkali metal Alkaline earth metal silicate aggregates with a density between 0.1 kg / l and 3.0 kg / l. The usual particle size distribution is between 0.001 and 0.5 mm.
Diese porösen Füllsubstanzen bewirken zum einen eine statische Stabilisierung der Einschlußkörper, und zum anderen sind sie durch ihre gasgefüllte, poröse Struktur in der Lage, austretende Flüssigkeit in ihrem Inneren aufzunehmen.On the one hand, these porous filling substances cause a static stabilization of the Inclusion bodies, and on the other hand they are in the gas-filled, porous structure in the Able to absorb liquid leaking from inside.
Als Nährstoffe eigenen sich sowohl wasserlösliche natürliche Kohlenhydrate als auch wasserunlösliche Nährstoffe. Wasserlösliche Kohlenhydrate können von dem wachsenden Pilz direkt verwertet werden. Wasserunlösliche Nährstoffe, wie die beschriebenen Pflanzen materialien, werden durch vom Pilz ausgeschüttete Enzyme hydrolysiert und so ebenfalls zugänglich gemacht. Feinvermahlene Pflanzenmaterialien stabilisieren darüber hinaus die Polymermatrix.Both water-soluble natural carbohydrates and are suitable as nutrients water-insoluble nutrients. Water soluble carbohydrates can grow from the Mushroom can be used directly. Water-insoluble nutrients like the plants described materials are hydrolyzed by enzymes released by the fungus and so too made accessible. Fine-ground plant materials also stabilize the polymer matrix.
Durch das Immobilisierungsverfahren ist man in der Lage die jeweiligen optimalen Nährstoffe bzw. Nährstoffgemische mit einzuschließen.The immobilization process enables you to find the optimal one Include nutrients or nutrient mixtures.
Der Speisepilzstarterkultur können ferner erfindungsgemäß Biocide zugesetzt werden. Bei der Beimpfung von biologisch abbaubaren Materialien befinden sich in Strohballen oder Holzstämmen Konkurrenzmikroorganismen wie niedere Schimmelpilze und Bakterien. Diese können die eingebrachte Starterkultur, bedingt durch ihre Schnellwüchsigkeit, besiedeln und somit den Speisepilz verdrängen. Biocide, wie z. B. selektiv wirkende Fungizide oder Bakterizide, hemmen das Wachstum dieser Konkurrenzmikroorganismen und ermöglichen somit eine rasche Besiedlung mit dem Kulturspeisepilz. Da derartige Verbindungen meist thermolabil sind, ist es durch das Immobilisierungsverfahren möglich, diese sterilfiltriert der Fällungsmasse vor der Fällung zuzusetzen. According to the invention, biocides can also be added to the edible starter culture. When inoculating biodegradable materials are in straw bales or Logs competing microorganisms such as low mold and bacteria. These can the introduced starter culture, due to their rapid growth, colonize and thus displace the edible mushroom. Biocides such as B. selective fungicides or bactericides inhibit growth of these competing microorganisms and thus enable rapid colonization with the Culture mushroom. Since such connections are usually thermolabile, it is due to that Immobilization process possible, this sterile filtered the precipitate before Add precipitation.
Die erfindungsgemäß beanspruchte Starterkultur weist überraschend wie folgt beschriebene Vorteile gegenüber herkömmlichen Immobilisierungsverfahren in der Biotechnologie sowie herkömmlicher Pilzbrutsubstrate ausgehend von Getreidekörnern auf:The starter culture claimed according to the invention surprisingly has the following description Advantages over conventional immobilization processes in biotechnology as well as conventional mushroom brood substrates based on cereal grains on:
- 1) Durch die in den Patentansprüchen 4 und 5 genannten anorganischen Zusätze ist man in der Lage, geringste Zelldichten bzw. Zellzahlen in ein ionotropes Gel einzuschließen, ohne daß bei der Lagerung in der Fällungslösung bzw. nach dem Entfernen der Flüssigkeit eine Schrumpfung des Einschlußkörpers erfolgt bzw. eine Schwitzwasserbildung während der Bebrütung und Lagerung auftritt. Aus den Beispielen 3 und 4 in den Tabellen 1 und 2 ist zu ersehen, daß die Schrumpfung bzw. die Schwitzwasserbildung durch diese erfindungsgemäß genannten Zusätze auf 1,3% in Beispiel 3 und 1,6% in Beispiel 4 begrenzt werden konnte, im Gegensatz zu 51,1% in Beispiel 1 und 33,0% in Beispiel 2, die Verfahren gemäß dem Stand der Technik darstellen. Die einzuschließende Zellzahl kann minimal bis auf 1 keimbildende Einheit (Hyphen, Hyphenverband, Spore) pro Einschlußkörper gesenkt werden.1) Due to the inorganic additives mentioned in claims 4 and 5 one is in able to enclose the lowest cell densities or cell numbers in an ionotropic gel without that when stored in the precipitation solution or after removing the liquid Shrinkage of the inclusion body takes place or condensation forms during the Incubation and storage occurs. From Examples 3 and 4 in Tables 1 and 2 it can be seen that the shrinkage or the formation of condensation by these additives mentioned according to the invention to 1.3% in Example 3 and 1.6% in Example 4, as opposed to 51.1% in Examples 1 and 33.0% in Example 2, which represent methods according to the prior art. The cell count to be included can be reduced to a minimum of 1 nucleating unit (hyphae, Hyphal bandage, spore) per inclusion body.
- 2) Die Endausbeuten an verwendbarer Starterkultur sind durch die genannten Zusätze gemäß Anspruch 4 und 5 drastisch erhöht. In Beispiel 3 konnten 106,4% relative Endausbeutesteigerung und in Beispiel 4 sogar 159,3% relative Endausbeutesteigerung erzielt werden.2) The final yields of usable starter culture are given by the above Additives according to claim 4 and 5 increased drastically. In Example 3, 106.4% relative final yield increase and in Example 4, even 159.3% relative final yield increase can be achieved.
- 3) Bedingt durch die fehlende Schwitzwasserbedeckung der Starterkulturkörper durchwächst die Starterkultur vollständig mit Mycel. In den Beispielen 1 und 2, die das Immobilisierungsverfahren gemäß dem Stand der Technik darstellen, wächst nur oberhalb des Flüssigkeitsspiegels Mycel.3) Due to the lack of condensation water, the starter culture grows through the starter culture completely with mycelium. In Examples 1 and 2, the immobilization method according to the prior art Representing technology only grows above the fluid level of mycelium.
- 4) Ein Verkleben der Starterkulturkörper tritt nicht ein. Die nach den Beispielen 3 und 4 erhaltenen Immobilisate sind nach Aufschütteln des Lagergefäßes rieselfähig. Herkömmliche Immobilisate nach den Beispielen 1, 2, 5 bleiben nach dem Aufschütteln verklebt. Dieses Verkleben macht vor der Anwendung ein Zerkleinern nötig, wodurch die Gefahr einer Sekundärinfektion mit Konkurrenzmikroorganismen gegeben ist. 4) The starter culture bodies do not stick together. The according to Examples 3 and 4 Immobilisates obtained are free-flowing after shaking the storage vessel. Conventional immobilizates according to Examples 1, 2, 5 remain after shaking glued. This sticking makes it necessary to shred them before use, so that There is a risk of secondary infection with competing microorganisms.
- 5) Das Herstellungsverfahren der beanspruchten Speisepilzstarterkultur geht von Rohstoffen aus, die einen geringen Keimgehalt aufweisen, im Gegensatz zu Getreidekörnern, die stark mit unerwünschten Fremdkeimen besiedelt sind. Die Dauer und die Kosten für die Sterilisation der Rohstoffe kann dadurch drastisch gesenkt werden.5) The production process of the claimed edible starter culture is based on raw materials from, which have a low germ content, in contrast to cereal grains, which are strong are colonized with unwanted foreign germs. This can drastically reduce the duration and costs of sterilizing the raw materials become.
- 6) Kurze Sterilisationszeiten bewirken einen nur geringfügigen Abbau von thermolabilen Wuchsfaktoren wie z. B. Vitamine.6) Short sterilization times cause only a slight degradation of thermolabile Growth factors such as B. Vitamins.
-
7) Durch das Immobilisierungsverfahren ist man in der Lage, temperaturempfindliche
Zusatzstoffe wie z. B. Biocide etc.
- a) sterilfiltriert und somit ohne Zersetzung und
- b) in das Innere des Starterkulturkörpers einzutragen.
- a) sterile filtered and thus without decomposition and
- b) to be entered into the interior of the starter culture body.
-
8) Durch das Immobilisierungsverfahren ist man nun auch in der Lage,
- a) unterschiedliche Kohlenstoffquellen in
- b) unterschiedlichen Konzentrationen den optimalen Nährstoffbedürfnissen des Pilzstammes anzupassen. Starterkulturen, aus Getreidekörnern gemäß dem Stand der Technik, können in Bezug auf Nährstoffart und Nährstoffkonzentration nicht variiert werden, da das Getreidekorn sowohl Nährstoffquelle als auch Träger ist.
- a) different carbon sources in
- b) adapt different concentrations to the optimal nutritional requirements of the mushroom strain. Starter cultures, from cereal grains according to the prior art, cannot be varied with regard to the type of nutrient and nutrient concentration, since the cereal grain is both a source of nutrients and a carrier.
- 9) Durch gezielte Nährstoffkonzentrationen kann nach der Durchwachsphase der erfindungsgemäß genannten Speisepilzstarterkultur der Pilz in ein Ruhestadium überführt werden. Die maximale Lagerdauer der Starterkultur bis zur Anwendung wird so verlängert.9) By means of targeted nutrient concentrations, the Mushroom starter culture according to the invention of the mushroom in a resting state be transferred. This extends the maximum storage period of the starter culture until use.
[Gemäß dem Stand der Technik für das Immobilisieren von Mikroorganismen][According to the prior art for immobilizing microorganisms]
20 g Natriumalginat (Viskosität 1%ig in Wasser: 800- 1000 cPs) wurde durch Einstreuen in 500 g destilliertes Wasser dispergiert und 16 Stunden bei 20°C über Nacht gequollen. Der pH-Wert wurde durch Zusatz von verdünnter Salzsäure auf 5,0 korrigiert und die so gewonnene hochviskose Lösung bei 121°C und 1,21 bar Wasserdampfdruck, 20 Minuten autoklaviert. Es resultierte eine 3,85%ige Lösung. 500 ml einer submersen Schüttelkultur von Marasmius scordonius (Stamm 137.83, Centraalbureau voor Schimmelcultures, Baarn, Niederlands], 14 Tage gewachsen auf 5,0 g/l Malzextrakt pH 5,0 wurden in ein steriles 2 l Becherglas überführt und 1 Minute bei 20°C unter Kühlung mit einem Ultra-Turrax (Fa. Janke und Kunkel KG, IKA Werk Staufen) geschert. Die mikroskopische Analyse zeigte hauptsächlich Mycelbruchstücke von 5-100 micrometer Durchmesser. Nach 30 Minuten Standzeit, war die gescherte Submerskultur entlüftet. 50 g der so gewonnen Mycelsuspension wurden mit 50 g der Natriumalginatlösung unter sterilen Bedingung verrührt.20 g sodium alginate (viscosity 1% in water: 800- 1000 cPs) was dispersed by sprinkling in 500 g of distilled water and 16 hours swollen overnight at 20 ° C. The pH was diluted by adding Hydrochloric acid corrected to 5.0 and the highly viscous solution thus obtained at 121 ° C and 1.21 bar water vapor pressure, autoclaved for 20 minutes. A 3.85% solution resulted. 500 ml of a submerged shake culture from Marasmius scordonius (strain 137.83, Centraalbureau voor Schimmelcultures, Baarn, Netherlands], grown up 14 days 5.0 g / l malt extract pH 5.0 was transferred to a sterile 2 l beaker and added for 1 minute 20 ° C under cooling with an Ultra-Turrax (from Janke and Kunkel KG, IKA plant in Staufen) sheared. Microscopic analysis showed mainly mycelial fragments of 5-100 micrometer diameter. After standing for 30 minutes, it was sheared Vented submerged culture. 50 g of the mycelium suspension thus obtained were mixed with 50 g of the Sodium alginate solution stirred under sterile conditions.
27,75 g einer 40%igen Calciumchloridlösung wurden zusammen mit 5 g Malzextraktpulver (Fa. Merck Darmstadt) in 967 ml destilliertem Wasser gelöst, mit verdünnter Salzsäure auf pH 5,0 korrigiert und bei 121°C und 1,21 bar Wasser dampfdruck, 20 Minuten autoklaviert.27.75 g of a 40% calcium chloride solution were together with 5 g of malt extract powder (Merck Darmstadt) in 967 ml of distilled water dissolved, corrected to pH 5.0 with dilute hydrochloric acid and at 121 ° C and 1.21 bar water vapor pressure, autoclaved for 20 minutes.
Die natriumalginathaltige Mycelsuspension wurde mittels einer Schlauchpumpe und einer Glaskapillare (Innendurchmesser 1 mm) innerhalb von 10 Minuten unter leichtem Rühren in 150 g der Fällungslösung getropft. Die so entstandenen kugelförmigen Einschlußkörper wurden 24 Stunden zum vollständigen Durchhärten in der Fällungslösung belassen. Rückwägung ergab die tatsächliche Fällungsmasse. Nach sterilem Absieben der Fällungslösung wurden die Einschlußkörper in einem sterilen Filtersiebbeutel (20 micrometer Maschenweite), 5 Minuten bei 500 x g [relative Zentrifugalbeschleunigung] zur Entfernung anhaftender Fällungslösung zentrifugiert, gewogen und in sterile 100 ml Gläser gefüllt. Zur Ermittlung der Schrumpfung und der Schwitzwasserbildung wurde 21 Tage im Dunkeln bei 24°C im Brutschrank bebrütet. Nach 21 Tagen wurde die Gesamthöhe der Einschlußkörper sowie 35 die Höhe des Schwitzwassers ermittelt. Durch erneutes Zentrifugieren konnte die Restmasse an Einschlußkörper ermittelt und hieraus die prozentuale Schrumpfung bzw. Schwitzwasserbildung errechnet werden. Die bei diesem Beispiel gemäß dem Stand der Technik erzielte Starterkultur zeigte außer gewöhnlich hohe Ausbeuteverluste sowie eine ungenügende Lagerstabilität, wie aus Tabelle 1 und 2 zu ersehen ist. The mycelium suspension containing sodium alginate was removed using a peristaltic pump and a glass capillary (inner diameter 1 mm) within 10 minutes with gentle Stir added dropwise in 150 g of the precipitation solution. The spherical inclusion bodies thus formed were complete for 24 hours Leave to harden in the precipitation solution. Weighing back gave the actual result Precipitation mass. After sterile sieving of the precipitation solution, the Inclusion bodies in a sterile filter sieve bag (20 micrometer mesh size), 5 minutes at 500 x g [relative centrifugal acceleration] to remove adhering precipitation solution centrifuged, weighed and filled into sterile 100 ml glasses. To determine the Shrinkage and condensation was observed in the dark at 24 ° C for 21 days Incubator incubated. After 21 days, the total height of the inclusion bodies and 35 the amount of condensation is determined. By centrifuging again, the Residual mass of inclusion body determined and from this the percentage shrinkage or Condensation can be calculated. The starter culture achieved in this example according to the prior art showed except usually high yield losses and insufficient storage stability, such as from Tables 1 and 2 can be seen.
[Gemäß dem Stand der Technik für das Immobilisieren von Mikroorganismen][According to the prior art for immobilizing microorganisms]
40 g Natriumalginat (Viskosität 1%ig in Wasser: 800- 1000 cPs) wurden analog dem Verfahrensbeispiel 1 anstelle von 20 g Natriumalginat eingesetzt. Es resultierte eine 7,40%ige Lösung, die in identischen Einsatzmengen von Beispiel 1 zur Fällungsmasse weiterverarbeitet wurde. Die Herstellung der Fällungslösung und die Fällung sowie die weitere Verarbeitung erfolgten analog Beispiel 1.40 g sodium alginate (viscosity 1% in water: 800- 1000 cPs) were analogous to process example 1 instead of 20 g of sodium alginate used. The result was a 7.40% solution, which was used in identical quantities Example 1 was further processed to precipitate. The preparation of the precipitation solution and the precipitation and further processing were carried out analogously to Example 1.
Trotz der Konzentrationsverdopplung an Gelbildner resultierten hohe Ausbeuteverluste sowie eine ungeeignete Lagerstabilität, wie aus den Tabellen 1 und 2 zu ersehen ist.Despite the doubling of the concentration of gelling agents, high yield losses resulted and an unsuitable storage stability, as can be seen from Tables 1 and 2.
Analog dem verfahrenstechnischen Beispiel 1, das den gegenwärtigen Stand der Technik darstellt, wurden gemäß den Patentansprüchen 1.1-1.4, 2, 4, 5, 8, der Fällungsmasse erfindungsgemäß genannte Zusätze gemacht.Analogous to process engineering example 1, which represents the current state of the art represents, were according to the claims 1.1-1.4, 2, 4, 5, 8, the precipitation mass additives mentioned according to the invention made.
Übereinstimmend mit Beispiel 1 wurden 20 g Natriumalginat (Viskosität 1%ig in Wasser: 800-1000 cPs) in 500 g destilliertem Wasser dispergiert, durch Zusatz von verdünnter Salzsäure auf pH 5,0 korrigiert und 16 Stunden bei 20°C gequollen. Die erhaltene hochviskose Natriumalginatlösung wurde bei 121°C und 1,21 bar Wasserdampfdruck 20 Minuten autoklaviert. Unter Rühren wurde in 44,44 g dieser sterilen Natriumalginatlösung, 5,56 g steriles, amorphes, gasgefülltes, Aluminium-Alkalimetall-Erdalkalimetall-Silikat-Aggregatpulver der Dichte von 0,25 kg/l und einem Schüttgewicht von 135 kg/m3, eingetragen. 50 g der anlog Beispiel 1 gescherten Mycelsuspension von Marasmius scordonius wurden mit den 50 g der silikathaltigen Natriumalginatlösung verrührt. Die Herstellung der Fällungslösung , die Fällung und die weiteren Verfahrensschritte erfolgten analog Beispiel 1.In accordance with Example 1, 20 g of sodium alginate (viscosity 1% in water: 800-1000 cPs) were dispersed in 500 g of distilled water, corrected to pH 5.0 by adding dilute hydrochloric acid and swollen at 20 ° C. for 16 hours. The highly viscous sodium alginate solution obtained was autoclaved at 121 ° C. and 1.21 bar water vapor pressure for 20 minutes. While stirring, 44.44 g of this sterile sodium alginate solution, 5.56 g of sterile, amorphous, gas-filled, aluminum-alkali metal-alkaline earth metal-silicate aggregate powder with a density of 0.25 kg / l and a bulk density of 135 kg / m 3 , registered. 50 g of the mycelium suspension of Marasmius scordonius sheared as in Example 1 were stirred with the 50 g of the silicate-containing sodium alginate solution. The precipitation solution, the precipitation and the further process steps were prepared analogously to Example 1.
Es resultierten kugelförmige Einschlußkörper, die bedingt durch ihre geringere Dichte auf der Oberfläche der Fällungslösung schwimmen. Konform Beispiel 1 wurden diese weiterverarbeitet.The result was spherical inclusion bodies, which due to their lower density on the Float the surface of the precipitation solution. These became compliant with Example 1 processed further.
Es wurden erstaunlich hohe Fällungsmasseausbeuten und überraschend gute Lagerstabilitäten erzielt, wie aus den Tabellen 1 und 2 zu ersehen ist. There were surprisingly high precipitation mass yields and surprisingly good ones Storage stability achieved, as can be seen from Tables 1 and 2.
Analog dem verfahrenstechnischen Beispiel 1, das den gegenwärtigen Stand der Technik darstellt, wurden gemäß den Patentansprüchen 1.1-1.5, 2, 3, 4, 5, 7, 8, der Fällungsmasse erfindungsgemäß genannte Zusätze gemacht.Analogous to process engineering example 1, which represents the current state of the art represents, according to the claims 1.1-1.5, 2, 3, 4, 5, 7, 8, the Precipitation mass made according to the invention additives.
Übereinstimmend mit Beispiel 1 wurden 20 g Natriumalginat (Viskosität 1%ig in Wasser: 800-1000 cPs) in 500 g destilliertem Wasser dispergiert und 16 Stunden bei 20°C gequollen. In 500 g dieser hochviskosen Lösung wurden 20,0 g Buchenholzmehl (Feinschliff mit einer Partikelgröße ( 1 mm), sowie 11,0 g nadelförmiges, wasserlösliches Aluminium-Natriumsilikat [Montmorillonit; Typische Analyse: 73,0% SiO2; 20,0% Al2O3; 4,0% Na2O; 0,6% Fe2O2; 0,9% CaO; 0,5% MgO; 1,0% CO2; Dichte: 2,7 kg/m3]; eingestreut und diese Masse durch einmaliges Passieren einer Kolloidmühle homogenisiert. Die sich dabei auf 40°C erwärmende Dispersion wurde auf 20°C abgekühlt, mit gesättigter Zitronensäurelösung auf pH 5,0 korrigiert und 20 Minuten bei 121°C und 1,21 bar Wasserdampfdruck sterilisiert. Zu 44,44 g dieser sterilen hochviskosen Dispersion wurden analog Beispiel 3 5,56 g steriles, amorphes, gasgefülltes, Aluminium-Alkalimetall-Erdalkalimetall-Silikat-Aggregatpulver der Dichte von 0,25 kg/l und einem Schüttgewicht von 135 kg/m3, eingetragen. Anschließend wurde unter Rühren 0,05 g einer 2%igen Lösung von Du Pont-Benomyl (Warenzeichen der Du Pont; Wirkstoff: Benomyl) als Fungizid sowie 50 g der analog Beispiel 1 gescherten Mycelsuspension von Marasmius scordonius zugegeben. Die Präparation des Fällungsbades und die Fällung sowie die weiteren Arbeitsschritte wurden nach Beispiel 1 durchgeführt.In accordance with Example 1, 20 g of sodium alginate (viscosity 1% in water: 800-1000 cPs) were dispersed in 500 g of distilled water and swollen at 20 ° C. for 16 hours. In 500 g of this highly viscous solution, 20.0 g of beech wood flour (fine grinding with a particle size (1 mm) and 11.0 g of needle-shaped, water-soluble aluminum-sodium silicate [montmorillonite; typical analysis: 73.0% SiO 2 ; 20.0% Al 2 O 3 ; 4.0% Na 2 O; 0.6% Fe 2 O 2 ; 0.9% CaO; 0.5% MgO; 1.0% CO 2 ; density: 2.7 kg / m 3 ]; sprinkled in and this mass homogenized by passing it once through a colloid mill, the dispersion, which heated to 40 ° C., was cooled to 20 ° C., corrected to pH 5.0 with saturated citric acid solution and for 20 minutes at 121 ° C. and 1.21 bar To 44.44 g of this sterile, highly viscous dispersion, 5.56 g of sterile, amorphous, gas-filled, aluminum-alkali metal-alkaline earth metal-silicate aggregate powder with a density of 0.25 kg / l and a bulk density of 135 kg were added as in Example 3 / m 3 , and 0.05 g of a 2% solution of Du Pont-Benomyl (trademark of Du Pont; Active ingredient: benomyl) as a fungicide and 50 g of the mycelium sheared by Marasmius scordonius sheared as in Example 1 are added. The preparation of the precipitation bath and the precipitation as well as the further work steps were carried out according to example 1.
Die so resultierende Pilzbrut zeigte eine außergewöhnlich hohe Endausbeute von 85,3% an Einschlußkörper nach der Lagerung. Des weiteren bildeten sich nur 1,6% Schwitzwasser. Die Starterkultur war nach Aufschütteln rieselfähig.The resulting mushroom brood showed an exceptionally high final yield of 85.3% Inclusion body after storage. Furthermore, only 1.6% condensation water was formed. The starter culture was after shaking free-flowing.
Verfahren gemäß dem Stand der Technik für die Herstellung von Starterkulturen auf Getreidekörnerbasis. [Nach Prof. Dr. Jan Lelley, Pilzanbau, Biotechnologie der Kulturspeisepilze, Stuttgart: Ulmer, 1991; Seite 68 ff.] 1 kg Weizenkörner wurden mit 1,5 l Leitungswasser zum Kochen gebracht und weitere 15 Minuten bei geringerer Wärmezufuhr gekocht. Anschließend wurde 15 Minuten nachgeqollen, das überschüssige Wasser über ein Sieb entfernt und die Körner oberflächlich getrocknet. State-of-the-art methods for the production of starter cultures Grain base. [After Prof. Dr. Jan Lelley, Mushroom Cultivation, Biotechnology at Culture mushrooms, Stuttgart: Ulmer, 1991; Page 68 ff.] 1 kg of wheat grains were brought to a boil with 1.5 l of tap water and another 15 Minutes cooked with less heat. This was followed by 15 minutes swelled, the excess water removed through a sieve and the grains superficially dried.
900 g dieser getrockneten Getreidekörner wurden mit 12,0 g Calciumsulfat-0,5-Hydrat (Gips), 3,0 g Calciumcarbonat (Schlämmkreide) gut vermischt. 600 g dieser Mischung wurden in ein 1 l Glasgefäß gefüllt, mit einem Wattestopfen verschlossen und 40 Minuten bei geöffnetem Entlüftungsventil des Autoklaven auf 100-120°C aufgeheizt. Nach der Aufheizphase wurde bei 121°C 90 Minuten sterilisiert und dann innerhalb von 20 Minuten auf 100°C abgekühlt. Nach dem vollständigen Erkalten unter sterilem Druckausgleich wurde mit 5 ml der nach Beispiel 1 gewonnen Mycelsuspension von Marasmius scordonius durch Auftropfen beimpft. Anschließend wurde ebenfalls 21 Tage bei 24°C im Brutschrank bebrütet.900 g of these dried cereal grains were mixed with 12.0 g calcium sulfate 0.5 hydrate (Gypsum), 3.0 g calcium carbonate (chalk) mixed well. 600 g of this mixture were placed in a 1 liter glass jar, sealed with a cotton plug and 40 minutes heated to 100-120 ° C with the autoclave vent valve open. After the heating phase, sterilization was carried out at 121 ° C. for 90 minutes and then within 20 Minutes cooled to 100 ° C. After cooling completely under sterile pressure compensation, the after was with 5 ml Example 1 Mycelium suspension of Marasmius scordonius obtained by dropping inoculates. Then incubation was also carried out in the incubator at 24 ° C. for 21 days.
Es resultierte eine kompakte nicht rieselfähige Starterkultur, die überraschenderweise ebenfalls eine geringfügige Bildung von Schwitzwasser zeigte, wie aus Tabelle 2 zu ersehen ist. The result was a compact, free-flowing starter culture, which surprisingly also showed a slight formation of condensation water, as can be seen from Table 2 is.
Claims (9)
- 1.1 einer anorganischen und/oder organischen Polymermatrix und
- 1.2 Pilzhyphen und/oder Pilzsporen und/oder Mycelaggregaten von Speisepilzen sowie
- 1.3 einer anorganischen und/oder organischen Stütz- bzw. Füllsubstanz sowie gegebenenfalls
- 1.4 wasserlöslichen und/oder wasserunlöslichen Nährstoffen sowie gegebenfalls
- 1.5 biociden Agenzien.
- 1.1 an inorganic and / or organic polymer matrix and
- 1.2 Fungal hyphae and / or fungal spores and / or mycelial aggregates of edible mushrooms and
- 1.3 an inorganic and / or organic supporting or filling substance and, if appropriate
- 1.4 water-soluble and / or water-insoluble nutrients and, if necessary
- 1.5 biocidal agents.
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