DE69631688T2

DE69631688T2 - Indanverbindungen mit relaxierender Wirkung auf die glatten Muskeln und/oder mit Mastzellen stabilisierender und/oder entzündungshemmender Wirkung

Info

Publication number: DE69631688T2
Application number: DE69631688T
Authority: DE
Inventors: John Walsh; Neil Frankish; Helen Sheridan; William Byrne
Original assignee: Venantius Ltd
Current assignee: Venantius Ltd
Priority date: 1995-12-06
Filing date: 1996-12-06
Publication date: 2005-01-20
Anticipated expiration: 2016-12-07
Also published as: KR19990071978A; AU1169297A; GB2322859A; CA2239694A1; DE69629387T2; JP2000502328A; US6297399B1; AU1169397A; EP0874800B1; US6423752B1; IL124756A; KR19990072007A; US6300376B1; EP0865419A1; JP2000502072A; CA2239694C; JP2000506497A; AU1169197A; DE69629390D1; EP0874800A1

Description

Die Verbindung betrifft Indanverbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung, Zusammensetzungen, die diese enthalten und ihre pharmakologische Verwendung.
Die Synthese von substituierten Indanverbindungen ist in J. Med Chem. 20, 1400-08 (1977) (D11), J Med. Chem. 27, 840-5 (1984) (D12) und in der DE-A-2448395 (D13) beschrieben worden.
Erfindungsgemäß wird eine Verbindung der Formel 7 zur Verfügung gestellt:
worin X für NR steht, worin R für H, Acyl, Alkyl oder Sulphonatgruppen steht;
R², ¹R³, R⁸, R⁹, ¹R⁹, ¹R¹⁰, R¹¹, ¹R¹¹, R¹², ¹R¹² und R¹³ ausgewählt sind aus einem oder mehreren der gleichen oder verschiedenen von:
H, Halo, Hydroxy, Alkoxy, Aryloxy, Acetoxy, Carboxy, Alkyl, Carbonyl, Hydroxylcarbonyl, Amino, Amido, Alkylamino, Hydroxylamino, C₁-C₁₀-Alkyl oder C₃-C₈-Cycloalkyl-Gruppen, jedwedes eine oder mehrere von R⁹, ¹R⁹, ¹R¹⁰, R¹¹, ¹R¹¹, R¹² ¹R¹² zusammen Oxo darstellen können und pharmakologisch verträgliche Salze, Ester, Amide, Solvate und Isomere davon.
In einer Ausführungsform der Erfindung sind das Alkyl oder Cycloalkyl mit einem oder mehreren der gleichen oder verschiedenen von Halo, Oxo, Hydroxy, Alkoxy, Aryloxy, Acetoxy, Carboxy, Carbonyl, Amino, Amido, Alkylamino, Hydroxylamino substituiert.
In Formel 7 bedeuten R¹⁰ und R¹¹ bevorzugt Wasserstoff.
In Formel 7 sind solche Verbindungen wegen ihrer pharmakologischen Aktivität als Mastzellenstabilisatoren insbesondere bevorzugt, worin:

R², ¹R² H, OH bedeuten;
X NR bedeutet;
R¹³ ein Benzyl bedeutet; und
R⁸ und R⁹ oder R⁸ und R¹² zusammen eine Doppelbindung darstellen, oder X NR bedeutet, worin R H, Acyl, Alkyl, Allyl, Benzyl oder Sulphonat-Gruppen bedeutet, bevorzugt worin X NR bedeutet, worin R Alkyl bedeutet.

In Formel 7 sind solche Verbindungen wegen ihrer pharmakologischen Aktivität als entzündungshemmende Mittel insbesondere bevorzugt, worin
X NR bedeutet, worin R Acyl bedeutet.
Die Erfindung betrifft die obigen Verbindungen, insbesondere bei der Herstellung von Medikamenten als Relaxanzien für den glatten Muskel und/oder als Mastzellen stabilisierende Mittel und/oder als entzündungshemmende Mittel.
Die Erfindung betrifft ebenfalls pharmazeutische Zusammensetzungen, die die Verbindungen enthalten, und ihre Verwendung in Verfahren zur Prophylaxe oder Behandlung insbesondere dafür, um eine relaxierende Aktivität des glatten Muskels und/oder maststabilisierende Aktivität und/oder entzündungshemmende Aktivität zu erreichen.
Die Erfindung betrifft ebenfalls die Verbindungen per se, die im Anhang 2 angegeben sind.
Die Erfindung stellt ebenfalls verschiedene Verfahren zur Herstellung der Indanverbindungen, wie in den Ansprüchen ausgeführt, zur Verfügung. Diese Verfahren werden nun nachfolgend detaillierter beschrieben.
1. Verknüpfung von Cyclopentylaminderivaten an 3-Bromindanonderivate für Verbindungen in Formel 7, worin X Stickstoff ist.
Die allgemeine Reaktionsprozedur für diese Umsetzung ist wie folgt: Es wurden Cyclopentylaminderivate in trockenem DCM gelöst, und dazu wurde ein Äquivalent 3-Bromindanon gegeben. Die Reaktionslösung wurde dann auf 0°C abgekühlt, und es wurde Triethylamin als tertiäre Base hinzugegeben. Man ließ die Lösung bei 0°C für 3 Stunden rühren. Das Produkt wurde über eine Blitzsäulenchromatographie gereinigt.
2. N-Alkylierung der Produkte aus der Reaktionsprozedur Nr. I
Die Verbindung wurde in DCM gelöst, und dazu wurde Triethylemin als tertiäre Base gegeben. Das gewünschte Alkylierungsmittel wurde dann hinzugegeben, und man ließ die Lösung bei Raumtemperatur für 3 Stunden rühren. Das Reaktionsgemisch wurde dann über eine Blitzsilikasäule gegeben, und das Produkt wurde eluiert.
3. Sulfonylierung der Produkte aus der Reaktionsprozedur Nr. 1
Die Verbindung wurde in DCM gelöst, und dazu wurde p-Toluolsulfonylchlorid und Triethylamin gegeben. Man ließ die Lösung bei 0°C für 15 Minuten rühren, und dann bei Raumtemperatur für eine weitere Stunde. Pyridin wurde dann in die Reaktionslösung gegeben, und man ließ die Reaktion für weitere zwei Stunden rühren. Das rohe Reaktionsgemisch wurde durch eine Blitzsilikasäule gegeben.
4. N-Acylierung der Produkte aus der Reaktionsprozedur Nr. 1
Die Verbindung wurde in DCM gelöst, und dazu wurde Triethylamin und Acetanhydrid gegeben. Zu dieser Lösung wurde unter Rühren DMAP gegeben. Die Reaktion ließ man bei Raumtemperatur für 3 Stunden rühren. In das Reaktionsgemisch wurde eine 2 molare Lösung wässriger HCl gegeben, und das Lösungsmittel wurde unter Verwendung von Toluol entfernt. In das Rohmaterial wurde eine wässrige NaHCO₃-Lösung gegeben, und das Produkt wurde in Ether extrahiert, die organischen Schichten wurden vereint und das Lösungsmittel entfernt. Das Rohmaterial wurde dann durch eine Blitzsilikasäule für die Reinigung gegeben.
5. Natriumborhydridreduktion der Verbindungen in Formel 7
Die erforderliche Verbindung wurde in Ethanol gelöst, und es wurde Natriumborhydrid in die Reaktion in kleinen Portionen über 10 Min. gegeben. Die Reaktion wurde dann bei Raumtemperatur für 3 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde in Wasser (20 ml) gegossen und in Diethylether (3 × 20 ml) extrahiert. Die Blitzsäulenchromatographie über Silikagel ergab das Produkt.
6. Oximsynthese der Verbindungen in Formel 7
Diese Prozedur ist insbesondere anwendbar auf die Synthese von Oximderivaten von Ketonverbindungen, die Wasserstoffatome in α-Stellung zum Keton aufweisen. Im Allgemeinen war die Prozedur wie folgt.
Die Ketonverbindung wurde in einer Lösung aus Methanol : Pyridin (4:1) gelöst, und in diese Lösung wurde dann Hydroylaminhydrochlorid gegeben. In Abhängigkeit der spezifischen Keton verbindung wurde die Reaktion entweder bei Raumtemperatur oder bei Rückfluss durchgeführt.
7. O-Alkylierung des Oxims der Verbindungen in Formel 7
Diese Prozedur ist insbesondere anwendbar auf die O-Alkylierung der synthetisierten Oximderivate. Im Allgemeinen war die Prozedur wie folgt.
Eine Lösung aus der Oximverbindung wurde in Ether:tert.-Butanol 3:1, gelöst. Benzylbromid wurde im Allgemeinen als Alkylierungsmittel verwendet, und es wurde in die Reaktionsmischung gegeben. Kalium-tert.-butoxid, 1 Äq., wurde tropfenweise in diese Lösung bei Raumtemperatur gegeben. Nach dem Aufarbeiten unter Verwendung von wässrigen Ammoniumchlorid und Ether der gewünschte Oximether nach der Chromatographie isoliert.
8. α-Alkylierung von O-Benzyloximen der Verbindungen in Formel 7
Diese Prozedur ist insbesondere auf die α-Alkylierung der Oximetherderivate anwendbar.
Die Prozedur war wie folgt.
Eine Lösung aus dem Oximether wurde in trockenem Ether gelöst und auf –78°C abgekühlt. In diese Lösung wurde n-Butyllithium gegeben, gefolgt von Benzylbromid im Überschuss. Die Reaktion wurde im Allgemeinen mit Wasser abgeschreckt. Das Produkt wurde mit Ether extrahiert und über eine Blitzsäulenchromatographie gereinigt.
9. Acetylierung der Hydroxylverbindungen in Formel 7
Die Prozedur bestand im Allgemeinen darin, die Verbindung für die Acetylierung in DCM zu lösen und Acetanhydrid als Acetylierungsmittel mit Triethylamin als Base und DMAP als Acylierungskatalysator zu verwenden.
10. Hydrolyse eines Esters der Verbindungen der Formel 7
Der erforderliche Ester wurde in einer Lösung aus 1,45 Mol Na-OH in THF:MeOH:H₂O (6:3:2) gelöst, die dann unter Rückfluss gehalten wurde. Nach 20 Minuten zeigte die TLC, dass die Hydrolyse des Esters vollständig war. Nach dem Abkühlen des Reaktionsgemisches wurde eine gesättigte Lösung aus wässrigen Ammoniumchlorid, wässriger HCl (2 Mol) und Ether hinzugegeben. Die organische Schicht wurde isoliert, und die wässrige Schicht wurde mit Ether extrahiert. Die vereinten organischen Extrakte wurden mit Na₂SO₄ getrocknet und filtriert. Bei der Verdampfung des Lösungsmittels verblieb die Säure.
Synthese von 7C3
In eine Lösung aus 3-Bromindan-1-on (200 mg, 0,95 mMol) in DCM (10 ml) wurde Triethylamin (200 mg, 1,98 mMol) und Cyclopentylamin (80 mg, 0,94 mMol) gegeben. Man ließ die Lösung bei 0°C für 1 Stunde rühren. Das Rohreaktionsgemisch wurde durch eine Blitzsilikasäule gegeben und mit Petroleumether:Ethylacetat, 1:1, eluiert. Nach der Verdampfung des Lösungsmittels wurde das 7C3 als Öl isoliert (175 mg, 85,8 %).
Synthese von 7C4
7C3 (200 mg, 0,93 mMol) wurde in Methanol gelöst, und dazu wurden 2 Mol wässrige HCl (15 ml) gegeben. Toluol wurde dann hinzugefügt und das Lösungsmittel bis zur Trockne verdampft, wobei man einen gelben Feststoff erhielt. Der Feststoff wurde dann in Wasser gelöst, und Ethylacetat wurde hinzugefügt, um irgendwelche organischen Verunreinigungen, die vorhanden waren, zu entfernen. Die wässrige Phase wurde extrahiert und bis zur Trockne eingedampft. Der Feststoff wurde dann in einer Minimalmenge von Methanol gelöst, und es wurde Ethylacetat hinzugegeben. Das Produkt ließ man dann auskristallisieren, und man erhielt das 7C4 als weißes Pulver (200 mg, 85,8 %).
Synthese von 7C5
7C3 (1,0 g, 4,65 mMol) wurde in DCM (10 ml) gelöst, die Lösung wurde dann auf 0°C abgekühlt, und in den Kolben wurde Triethylamin (0,55 g, 0,76 ml, 5,45 mMol) gegeben und es wurde Methyljodid (6,60 g, 2,90 ml, 0,046 Mol) hinzugefügt. Die Reaktion ließ man bei 0°C für 1 Stunde rühren, und dann ließ man die Lösung auf Raumtemperatur für weitere 15 Minuten kommen. Das Rohreaktionsgemisch wurde dann durch eine Blitzsilikasäule gegeben, wobei mit Petroleumether:Ethylacetat, 1:1, eluiert wurde. Das Produkt 7C5 erhielt man als Öl (850 mg, 78,7 %).
Massenspektroskopie geringer Auflösung
M⁺ 229
Synthese von 7C6
7C3 (200 mg, 0,093 mMol) wurde in DCM (10 ml) gelöst, und dazu wurden Triethylamin (110 mg, 0,11 mMol) und Allylbromid (1,12 g, 0,930 mMol) gegeben. Man ließ die Lösung bei 0°C für 1 Stunde rühren und dann bei Raumtemperatur für weitere 2 Stunden. Ein zweites Äquivalent von sowohl Triethylamin als auch Allylbromid wurde hinzugefügt, und man ließ die Reaktion für eine weitere Stunde rühren. Die Rohreaktion wurde durch eine Blitzsilikasäule gegeben, und man erhielt das Produkt 7C6 als gelbes Öl (198 mg, 83,5 %).
Synthese von 7C7
7C3 (1,0 g, 4,65 mMol) wurde in DCM (10 ml) gelöst, die Lösung wurde dann auf 0°C gekühlt, und in den Kolben wurden Triethylamin (0,55 g, 0,76 ml, 5,45 mMol) und Benzylbromid (7,95 g, 5,53 ml, 0,046 mol) gegeben. Man ließ die Reaktion bei 0°C für 1 Stunde rühren, und dann ließ man die Lösung auf Raumtemperatur für weitere 15 Minuten kommen. Das Rohreaktionsgemisch wurde über eine Blitzsilikasäule gegeben, wobei mit Petroleumether:Ethylacetat, 7:3, eluliert wurde. Man erhielt das Produkt 7C7 als Öl (900 mg, 64,3 %).
Synthese von 7C8
In eine Lösung von 7C3 (200 mg, 0,93 mMol) und p-Toluolsulfonylchlorid (1,45 g, 7,60 mMol) in DCM (10 ml) wurde unter Rühren Triethylamin (0,09 g, 0,13 ml, 0,91 mMol) gegeben. Man ließ die Lösung bei 0°C für 15 Minuten rühren. Man ließ die Lösung bei Raumtemperatur für eine weitere Stunden rühren, und in diese Lösung wurde Pyridin (0,26 ml) gegeben, und man ließ die Reaktion für weitere 2 Stunden rühren. Das Rohreaktionsgemisch wurde über eine Blitzsilikasäule gegeben, wobei mit Petroleumether:Ethylacetat, 1:4, eluiert wurde. 7C8 wurde als gelber Feststoff isoliert.
Synthese von 7C9
7C3 (700 mg, 0,325 mMol) wurde in DCM (5 ml) gelöst, und dazu wurde Triethylamin (0,657 g, 0,90 ml, 6,51 mMol) und Acetanhydrid (664 mg, 0,613 ml, 6,51 mMol) gegeben. Dann wurde in die Lösung unter Rühren DMAP (476 mg, 0,390 mMol) gegeben. Man ließ das Reaktionsgemisch bei Raumtemperatur für 3 Stunden rühren. In das Reaktionsgemisch wurde 2 molare wässrige HCl (5 ml) und 10 ml DCM gegeben. Man erhielt die organische Schicht und wusch sie mit Wasser. In die organische Schicht wurde eine 10 %ige NaHCO₃-Lösung (30 ml) gegeben. Die organische Phase wurde gesammelt, und die wässrige Schicht mit DCM gewaschen. Alle organischen Schichten wurden vereint und über Na₂SO₄ getrocknet. Die Rohreaktion ließ man dann über eine Blitzsilikasäule, wobei mit Petroleumether, 100 % und mit einer Abstufung aus Petroleumether:Ethylacetat, 1:4, eluiert wurde. Das Produkt 7C9 erhielt man als bräunlichen Feststoff (450 mg, 53,8 %)
Massenspektroskopie geringer Auflösung
M⁺ 257
Synthese von 7C10
Die Verbindung 7C5 (100 mg) wurde in trockenem Methanol (5 ml) gelöst, trockenes HCl-Gas wurde durch die Lösung für 5 Minuten geblasen. Das Methanol wurde dann verdampft, und es verblieb ein weißer Feststoff. Man ließ den Feststoff zwischen Wasser und Ether aufteilen. Die wässrigen Schichten wurden vereint und bis zur Trockne verdampft. Der weiße Feststoff 7C10, der verblieb, wurde an einer Vakuumleitung getrocknet (95 %).
Synthese von 3-Azido-indan-1-on
In eine Lösung aus 3-Bromindan-1-on (400 mg, 1,90 mMol) in DMF (5 ml) wurde tropfenweise Natriumazid (1,98 g, 0,03 Mol) gegeben. Man ließ die Reaktion bei Raumtemperatur für 15 Minuten rühren. Das Produkt ließ man zwischen Wasser (10 ml) und Ether (10 ml) aufteilen. Die Etherschichten wurden vereint, und das Rohreaktionsgemisch über eine Blitzsilikasäule gegeben, wobei mit Petroleumether:Ethylacetat (9:1) eluiert wurde. Das Produkt wurde als orangefarbiges Öl (283 mg, 86 %) isoliert. Vmax/cm–12101 (N3)
Selbstverständlich umfassen die Verbindungen ebenfalls die pharmakologisch annehmbaren Salze, Ester, Isomere und Solvate davon. Ein Beispiel für einen möglichen Ester ist ein Salicylat in mindestens einer oder möglicherweise verschiedenen geeigneten Positionen an der Verbindung. Dieses eröffnet die Möglichkeit einer Kombinationstherapie unter Verwendung einer Indanverbindung und Aspirin in einem einzigen Molekül. Das Gewichtsverhältnis der Basisindanverbindung zu Aspirin kann gewählt werden, indem ein Salicylat bei einer Anzahl von ausgewählten Positionen an der Verbindung vorgesehen wird.
Es sollte selbstverständlich sein, dass die Verbindungen ein oder mehrere chirale Zentren besitzen und somit als Enatiome renpaar oder als Diastereomerenmischung vorliegen. Diese kann eine Wirkung auf die pharmakologischen Eigenschaften haben.
Es sollte auch selbstverständlich sein, dass für pharmazeutische Zwecke die aktiven Verbindungen in jeder gewünschten Form unter Anwendung geeigneter Arzneistoffträger und/oder Träger formuliert sein können. Beispielsweise kann insbesondere für die Anwendung zur Erreichung einer entzündungshemmenden Wirkung die Verbindung in einer pharmazeutischen Zusammensetzung formuliert sein, die für die topische/transdermale Anwendung geeignet ist.
PHARMAKOLOGIE
Einführung
Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben eine starke Mastzellenstabilisierungsaktivität, eine Relaxansaktivität für glatte Muskeln und eine entzündungshemmende Aktivität. Die Verbindungen sind deshalb potentielle anti-asthmatische Mittel mit Bronchodilatoraktivität. Die Mastzellenstabilisierungsaktivität der Verbindungen legen ihre potentielle Anwendung bei der Behandlung von allergischer Rhinititis, allergischer Konjunktivitis und anderen anaphylaktischen oder allergischen Erkrankungen nahe. Die enzündungshemmende Aktivität kann Anwendungen bei Gicht, rheumatischen Erkrankungen, ankylosierter Spondylitis, Polymyalgia rheumatika, temporärer Arteritis, Polyarteritis nodosa, Polymyositis und systemischer Lupus arteriosis und anderen entzündlichen Erkrankungen aufweisen. Topische Anwendungen können umfassen: atopische Ekzeme, „weeping" Ekzeme, Exema psoriasis, chronische Discoid lupus erythematosus, Flech te simplex chronicus, hypertrophischer Lichen planus, Palmare plantare pustulosis. Sie können ebenfalls ein Potential bei der Behandlung einiger maligner Erkrankungen und als Immunsuppressoren aufweisen.
Die Relaxanzaktivität für glatte Muskeln der Verbindungen kann ein Potential bei der Behandlung von Bluthochdruck und artheriosklerotischer Gefäßerkrankungen, wie das intermittierende Hinken beim Reynaud's-Syndrom und anderen Herz- und Gefäßerkrankungen, wie die kongestive Herzinsuffizienz, Angina pektoris, zerebrale Gefäßerkrankungen und Lungenhochdruck, aufweisen. Diese Verbindungen sind ebenfalls für eine potentielle Anwendung bei der Behandlung gewisser Erkrankungen des Verdauungsextraktes, wie divertikuläre Erkrankungen und Reizcolon, indiziert sein. In ähnlicher Weise können diese Verbindungen ein Potential als Mittel für die Behandlungen von Erkrankungen des Genital-Harn-Trakts, wie verfrühte Wehen, Inkontinenz, Nierenkoliken und Erkrankungen, die mit dem Durchgang von Nierensteinen zusammenhängen, aufweisen. Mitglieder dieser Gruppe von Verbindungen können ebenfalls ein Potential als Diuretika, Analgetika, Antipyretika, lokale Anästhetika, Beruhigungsmittel des zentralen Nervensystems und Hypoglycämica aufweisen.
Die Verbindungen wurden auf ihre Fähigkeit, die Mastzellmembranen in vitro zu stabilisieren, untersucht. Es wurden Mastzellen, die mit den Verbindungen behandelt waren und nichtbehandelte Mastzellen dahingehend stimuliert, dass sie Histamin freigeben. Eine Reduktion der Histaminfreigabe durch die behandelten Zellen im Vergleich zu den nichtbehandelten Zellen zeigt eine Stabilisierung der Membran an. Die Verbindungen wurden ihre Fähigkeit, glatte Muskeln in vitro zu relaxieren, untersucht. Der glatte Muskel des Darms wurde unter Verwendung von Calciumchlorid zur Kontraktion stimuliert und anschließend mit den Verbindungen behandelt, und die Relaxation der Kontraktion wurde für jede Verbindung gemessen. Die Wirkungen der Verbindungen wurden ebenfalls auf die Relaxierung des Trachealmuskels des Guineaschweins untersucht. Beim Ohrödemtest bei der Maus wurden die Verbindungen topisch vor der Induktion der Entzündung durch die topische Anwendung von Arachidonsäure verabreicht. Die Breite des Ohrs wurde sowohl vor als auch nach der Behandlung als Index für ein Ödem bestimmt.

Es folgen Protokolle von jedem dieser Assays und eine Zusammenfassung der Ergebnisse. Abkürzungen

BSS	Puffersalzlösung
CaCl₂	Calciumchlorid
CO₂	Kohlenstoffdioxid
DMSO	Dimethylsulfoxid
DSCG	Dinatriumcromoglycat
cH₂O	destilliertes Wasser
HCl	Chlorwasserstoffsäure
HEPES	N-2-Hydroxyethylpiperazin-N-2-
	ethansulphonsäure
KCl	Kaliumchlorid
λ_em	Emissionswellenlänge
λ_ex	Anregungswellenlänge
Mol	Molar
MgCl₂	Magnesiumchlorid
Min	Minuten
ml	Milliliter

mMol	Millimolar
NaCl	Natriumchlorid
NaHCO₃	Natriumhydrogencarbonat
NaH₂PO	Natriumhydrogenphosphat
NaOH	Natriumhydroxid
O₂	Sauerstoff
OPT	o-Phthaldialdehyd
S.E.M.	mittlerer Standfehler
w/v	Gewicht pro Volumen
v/v	Volumen pro Volumen

Methoden
Histaminfreisetzungsassay
Es wurde vorher die Puffersalzlösung (BSS) hergestellt (NaCl 137 mMol; KCl 2,7 mMol; MgCl₂ 1,0 mMol; CaCl₂ 0,5 mMol; NaH₂PO₄ 0,4 mMol; Glucose 5,6 mMol; HEPES 10 mMol). Dieses wurde in Teströhrchen verteilt und auf 37°C erhitzt, wobei jedes Teströhrchen 4,5 ml BSS enthielt. Die Lösungsmittelblindprobe wurde mit 0,5 % (v/v) Dimethylsulfoxid (DMSO) oder 0,5 % (v/v) destilliertem Wasser (dH₂O) ergänzt. Die beiden positiven Kontrollen wurden mit 0,5 % (v/v) dH₂O ergänzt. Die zwei positiven Kontrollen wurden mit 0,5 % (v/v) dH₂O/2×10^–5 Dinatriumcromoglycat (DSCG) und 0,5 % (v/v) DMSO/2×10^–5 Mol DSCG ergänzt. Die Teströhrchen für die Inkubation mit den Verbindungen enthi_elten 2 × 10^–5 Mol Testverbindung / 0,5 % (v/v) DMSO. Die Inkubationsröhrchen für die Basisfreisetzung, maximale Freisetzung und den Gesamthistamingehalt enthielten keine Zugaben.
Weibliche Wistar-Ratten (200–300 g) wurden in einer Atmosphäre gesättigtem CO₂ getötet. Es wurde vorgewärmte BSS (10 ml) i.p. injiziert, und der Bauch wurde für 3 Minuten massiert. Die BSS mit den suspendierten Mastzellen und anderen Zellen wurde dem Mittellinieneinschnitt folgend angesaugt. Das Aspirat wurde für 5 Minuten bei 400 g zentrifugiert und der Überstand entfernt. Die Zellen wurden in BSS bei 4°C resuspendiert und wie zuvor zentrifugiert. Die Zellen wurden auf diese Weise insgesamt 3 Mal gewaschen. Nach dem letzten Waschen wurden die pelletisierten Zellen bei 4°C gelagert, um sie dann sobald als möglich zu verwenden.
Die Zellen wurden in 7 ml BSS resuspendiert. Davon wurden 0,5 ml Aliquots in jede der Inkubationsröhrchen übertragen. Nach 10 Minuten bei 37°C unter leichtem Rühren wurde die Verbindung 48/80 bis zu einer Endkonzentration von 2 mg/ml gegeben, um die Histaminfreisetzung zu stimulieren. Die Zellstimulierung wurde nach 2 Minuten durch die Zugabe von 0,5 ml eiskalter BSS gestoppt, die Inkubationsröhrchen wurden dann in ein Eisbad überführt. Die Zellsuspensionen wurden für 5 Minuten bei 400 g zentrifugiert. Das Röhrchen mit dem "Gesamthistamingehalt" wurde bei 100°C für 2 Minuten vor der Zentrifugation stehengelassen. Die Überstände wurden für den Histaminassay genommen.
Zu den 2 ml Überstand aus jedem Röhrchen wurden 0,4 ml 1 Mol NaOH und 0,1 ml oPT (1 % (w/v) in Methanol) gegeben. Dieses wurde bei Raumtemperatur für etwa 4 Minuten inkubiert. Die Reaktion wurde durch die Zugabe von 0,2 ml 3 Mol HCl gestoppt. Der Überstand aus jedem Inkubationsröhrchen wurde zwei Mal untersucht und gleichzeitig mit einer Standardkurve im Bereich von 0 – 1.000 ng/ml laufen gelassen. Die Gegenwart des fluoreszierenden Produkts der Reaktion wurde mit einem Shimadzu RF-1501 Spektrofluorophotometer, das bei λ_ex = 360 nm, λ_em =450nm eingestellt war, gemessen.
Jeder Wirkstoff wurde bei mindestens fünf Tieren (n = 5) getestet. Die Ergebnisse wurden als die Prozentzahl der maximalen Inhibierung der von der Verbindung 48/80 induzierten Histaminfreisetzung in der Lösungsmittelblindprobe ausgedrückt. Jeder Wirkstoff wurde gegenüber DSCG auf den gleichen Geweben verglichen. Die Basishistaminfreisetzung in den nicht behandelten Fällen wurde aufgenommen und als Prozentzahl des Gesamthistamingehalts in Suspension ausgedrückt. Das durch die Zellen freigesetzte maximale Histamin als Antwort auf die Verbindung 48/80 wurde in der relevanten Lösungsmittelblindprobe in der gleichen Weise ausgedrückt. Überall betrug die mittlere Basisfreisetzung 9,60 % (S.E.M. = 1,02) des Gesamthistamingehalts der Zellen (n = 55). Die maximal stimulierte Histaminfreisetzung betrug 67,38 % (S.E.M. = 2,90) in Gegenwart von 0, 5 % (v/v) dH₂O und 54, 87 % (S.E.M. = 2,69) in Gegenwart von 0,5 % (v/v) DMSO des Gesamthistamingehalts der Zellen (n=55).
Wirkungen auf glatte Muskeln
Guinea-Schweine (350 g etwa) von jedem Geschlecht wurden in einer Atmosphäre aus gesättigtem CO₂ getötet. Der Bauch wurde mit einem Mittellinieneinschnitt geöffnet, und der Dünndarm wurde entfernt. Die Trachea wurde entfernt und zwischen den Knorpelringen durchgeschnitten, die dann zerteilt wurden.
Es wurden Ileumsegmente (1–1,5 cm) in Krebs-Puffer mit hohem Kaliumgehalt und ohne Calcium (NaCl 160,4 mMol; KCl 45 mMol; MgCl₂ 0,54 mMol; NaH₂PO₄ 0,89 mMol; NaH₂CO₃ 24,9 mMol; Glucose 11,1 mMol) suspendiert. Die Tracheaschnitte wurden in normalem Krebs-Puffer (NaCl 236,5 mMol; KCl 4,7 mMol; CaCl₂ 2,5 mMol; MgCl₂ 0,54 mMol; NaH₂PO₄ 0,89 mMol; NaHCO₃ 24,9 mMol; Glucose 11,1 mMol) suspendiert. Diese Lösungen wurden bei 37°C in einem Außenwandorganbad gehalten und mit 95 % O₂ und 5 % CO₂ begast. Die Gewebe wurden mit einem Faden am Boden des Organbads verankert und von Kraftstellungsgebern unter einer Ruhespannung von etwa 1 g für das Ileum und etewa 4g für die Trachea suspendiert. Es wurden die isotonischen Kontraktionen unter Verwendung eines MacLab/4e-Systems zusammen mit dem Chart 3.3.1 Softwarepackage aufgenommen. Überflüssiges Gewebe wurde b_ei 4°C in Krebs-Puffer für maximal 48 Stunden aufbewahrt.
Es wurden vier Gewebesegmente suspendiert und gleichzeitig beobachtet. Die Kontraktionen wurden durch Zugabe von 25 μl 1 Mol CaCl₂ (Endkonzentration von 2,5 mMol) initiiert. Die Kontraktionen stabilisierten sich mit der Zeit, 10 – 15 Minuten und konnten bis zu 45 Minuten von der Zugabe des CaCl₂ an aufrechterhalten werden.
Vorratslösungen mit dem Wirkstoff wurden zu 10^–3 Mol in 50 (v/v) DMSO hergestellt. Diese wurden verdünnt, um 10^–4 Mol in 5 (v/v) DMSO und 10^–5 Mol in 0,5 % (v/v) DMSO herzustellen. Bei Fällen geringer Löslichkeit wurde der 10^–3 Mol Vorrat in höheren Konzentrationen von DMSO hergestellt. Lösungsmittel-"blindproben"lösungen wurden hergestellt, die 50 %, 5 % und 0,5 % (v/v) DMSO (oder entsprechend geeignet) hielten. Ein kummulativer Dosis-Antwort-Assay wurde im Bereich von 5 × 10^–8 Mol bis 10^–5 Mol durchgeführt. Ein zweiter kumulativer Dosis-Antwort-Assay wurde durchgeführt, wobei nur die DMSO-"Blindproben"-Lösungen verwendet wurden.
Jeder Wirkstoff wurde zweimal bei mindestens drei verschiedenen Tieren (n=3) getestet. Die Ergebnisse wurden als Prozentzahl der Inhibierung der durch CaCl₂ induzierten Kontraktion für das Ileumgewebe und Prozentzahl der Relaxation für das Tracheagewebe, für jedes Gewebe, bei jeder Konzentration des Wirkstoffs in DMSO ausgedrückt. Der Effekt von DMSO für jedes Gewebe bei jeder Konzentration wurde von dem Effekt des Wirkstoffs in DMSO abgezogen, womit man den Effekt des Wirkstoffs allein erhielt. Eine log-Kurve Dosis gegen Antwort wurde für jeden Wirkstoff unter Verwendung des Mittels und des Standardfehlers des Mittels für die gesamten Ergebnisse aufgetragen.
In vivo Entzündung
Das Ohrödemmodell bei der Maus wurde unter Verwendung von Laca-Mäusen (25 – 35 g) von jedem Geschlecht durchgeführt. Die Tiere wurden mit Fentanyl/Fluanison (Hypnorm, Janssen) sediert. Ein Ohr wurde durch die topische Anwendung einer der Testverbindungen, Indomethacin oder Dexamethazon (alle zu 300 μg Ohr in Aceton)-Wirkstoff, behandelt. Nach 30 Minuten wurde das Ödem durch die topische Anwendung von Arachidonsäure (10 μl bei 0,4 g/ml in Aceton)induziert. Die Dicke von jedem Ohr wurde gemessen, sowohl vor und 60 Minuten nach der Induktion des Ödems, wobei eine Mikrometerschraubenlehre verbunden wurde. Das Ohrödem wurde berechnet, indem die Ohrbreite vor und nach der Induktion des Ödems verglichen wurde, und es wurde als Prozentzahl normal ausgedrückt.
Ergebnisse
Mastzellenstabilisierungsaktivität
Die Ergebnisse der Assays über die Histaminfreisetzung und den Effekt auf den glatten Muskel sind in den anliegenden Ergebnistabellen zusammengefasst. Diese Ergebnisse zeigen, dass diese Verbindungen eine große Vielzahl von Wirkungen bei der Relaxierung des glatten Muskels und der Mastzellenstabilisierung zeigen, und dass diese beiden Effekte nicht miteinander verwandt sind (das heißt, ein guter Mastzellenstabilisator ist nicht notwendigerweise ein gutes Relaxans für den glatten Muskel und umgekehrt).
Entzündung
Ödemmodell am Ohr der Maus
Antworten des Mausohrs auf Einzeldosen einer Anzahl von Verbindungen im Vergleich zur Antwort auf Indomethacin und Dexamethason, jeweils bei einer Dosis von 300 μg pro Ohr, topisch verabreicht 30 Min vor der Verabreichung von 400 μg Arachidonsäure. Die Werte werden als Prozentzahl des Anstiegs der Ohrdicke eine Stunde nach Verabreichung der Arachidonsäure (alle n=4, außer 8C4 (n=5)) und der Lösungsmittelkontrollen (n=8) aufgedrückt. Die Ergebnisse legen nahe, dass die entzündungshemmende Aktivität nicht mit der Mastzellenstabilisierungsaktivität zusammenhängt.

Die Erfindung ist nicht auf die zuvor beschriebenen Ausführungsformen beschränkt, die jeweils im Detail verändert werden können. ANHANG 1 Liste der verwendeten Abkürzungen

AlCl₃	Aluminiumchlorid
aq	wässrig
b.p.	Siedepunkt
BrCH₂C₆H₄CO₂CH₃	Methyl 4- (brommethyl)benzoat
BrCH₂CO₂CH₃	Brommethylacetat
BSS	Puffersalzlösung
CaCl₂	Calciumchlorid
C₂H₅I	Jodethan
C₆H₃ (CH₃) Br (CH₃)	Brom-m-xylol
C₆H₅CH₂Br	Benzylbromid
CDCl₃	Chloroform-d
CF₃SO₃Si(CH₃)₃	Trimethylsilyltrifluormethansulfonat
	(TMS-Triflate)
CH(OCH₃)₃	Trimethylsilylorthoformat
CH₃C₆H₄SO₃H.H₂0	p-Toluolsulfonsäure
CH₃I	Jodmethan
ClCH₂CH₂COCl	[3-Chlorpropionylchlorid
CO₂	Kohlendioxid
CS₂	Kohlenstoffdisulfid
[(C₆H₅)₃P]₃RhCl	Tris (triphenylphosphin) rhodium (1) Chlorid
	(Wilkinson-Katalysator)
[(CH₃)₃CO]₃Al	Aluminium-tri-tert.-butoxid
DCM	Dichlormethan
dH₂O	destilliertes Wasser
DMSO	Dimethylsulfoxid
DSCG	Dinatriumcromoglycat
Et₂O	Ether

Et₃N	Triethylamin
EtOAc	Ethylacetat
EtOH	Ethanol
H₂C=CHCH₂Br	Allylbromid
H₂NNH₂. H₂O	Hydrazinhydrat. Monohydrat
H₂O	Wasser
H₂SO₄	Schwefelsäure
HCl	Chlorwasserstoffsäure
HEPES	N-2-Hydroxyethylpiperazin-N-2-
	ethansulfonsäure
HOCH₂CH₂OH	Ethylenglykol
IR	Infrarot
KCl	Kaliumchlorid
LDA	Lithiumdiisopropylamid
Mol	Molar
MgCl₂	Magnesiumchlorid
Min	Minuten
μl	Mikroliter
mMol	Millimolar
m.p.	Schmelzpunkt
N₂	Stickstoff
NaBH₄	Natriumborhydrid
NaCl	Natriumchlorid
NaCN(BH₃)	Natriumcyanoborhydrid
NaHCO₃	Natriumhydrogencarbonat
NaHCO₃	Natriumbicarbonat
NaH₂PO	Natriumhydrogenphosphat
NaOH	Natriumhydroxid
Na₂SO₄	Natriumsulfat
NH₄Cl	Ammoniumchlorid
NMR	Kernmagnetresonanz
O₂	Sauerstoff

oPT	o-Phthaldialdehyd
Pd	Palladium
RT	Raumtemperatur
^tBuOH	tert.-Butanol
^tBuOK	Kalium-tert.-butoxid
S.E.M.	mittlerer Standardfehler
THF	Tetrahydrofuran
TLC	Dünnschichtchromatographie
μl	Mikroliter
Triflic Acid	Trifluormethansulfonsäure
TMS Triflate	Trimethylsilyltrifluormethansulfonat
v/v	Volumen pro Volumen
w/v	Gewicht pro Volumen
ZnI₂	Zinkjodid
λ_em	Emissionswellenlänge
λ_2ex	Anregungswellenlänge

Claims

Verbindung der Formel 7:
worin X für NR steht, worin R für H, Acyl-, Alkyl- oder Sulfonat-Gruppen steht; R², ¹R³, R⁸, R⁹, ¹R⁹, ¹R¹⁰, R¹¹, ¹R¹¹, R¹², ¹R¹² und R¹³ ausgewählt sind aus einem oder mehreren der gleichen oder verschiedenen von: H, Halo, Hydroxy, Alkoxy, Aryloxy, Acetoxy, Carboxy, Alkylcarbonyl, Hydrocarbonyl, Amino, Amido, Alkylamino, Hydroxylamino, C₁-C₁₀-Alkyl- oder C₃-C₈-Cycloalkyl-Gruppen, jedwedes eine oder mehrere von R⁹, ¹R⁹, ¹R¹⁰, R¹¹, ¹R¹¹, R¹², ¹R¹² zusammen Oxo darstellen können und pharmakologisch verträgliche Salze, Ester, Amide, Solvate und Isomere davon.
Verbindung nach Anspruch 1, worin das Alkyl oder Cycloalkyl substituiert ist mit einem oder mehreren der gleichen oder verschiedenen von Halo, Oxo, Hydroxy, Alkoxy, Aryloxy, Acetoxy, Carboxy, Carbonyl, Amino, Amido, Alkylamino und Hydroxylamino.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, worin R¹⁰, ¹R¹⁰ und/oder R¹¹, ¹R¹¹ Wasserstoff darstellen.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin R², ¹R² H, OH darstellen.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin R¹³ Benzyl darstellt.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, worin R⁸ und R⁹ oder R⁸ und R¹² zusammen eine Doppelbindung darstellen.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, worin X für NR steht, worin R für H, Acyl-, Alkyl-, Allyl-, Benzyl- oder Sulfonat-Gruppen steht.
Verbindung nach Anspruch 7, worin X N substituiert durch Alkyl-Gruppen darstellt.
Verbindung ausgewählt aus: 3-(N-Cyclopentylamino)-indan-1-on 3-(N-Cyclopentylamino)-indan-1-on-Hydrochlorid 3-(N-Cyclopentyl-N-methylamino)-indan-1-on 3-(N-Cyclopentyl-N-prop-2-enylamino)-indan-1-on 3-(N-Cyclopentyl-N-benzylamino)-indan-1-on N-Cyclopentyl-N-3-indan-1-onyl p-toluensulfonamid N-Cyclopentyl-N-3-indan-1-onyl-ethanamid 3-(N-Cyclopentyl-N-methylamino)-indan-1-on-Hydrochlorid.
Pharmazeutische Zusammensetzung umfassend eine Verbindung der Formel 7, wie nach einem der Ansprüche 1 bis 9 definiert, und einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
Verwendung einer Verbindung der Formel 7, wie nach einem der Ansprüche 1 bis 10 definiert, bei der Herstellung eines Medikamentes zum Erreichen von Glattmuskel-relaxierender Aktivtät und/oder Mastzellen-stabilisierender Aktivität und/oder antiinflammatorischer Aktivität.